相关实验
实验承诺函
咨询记录
技术文章
城市
时间
国外
2024-11-21 10:12:16
江苏省苏州市
2024-11-21 00:49:34
浙江省宁波市
2024-11-20 21:11:24
江苏省
2024-11-19 22:33:30
广东省广州市
2024-11-19 21:19:26
河北省沧州市
2024-11-19 02:32:13
国外
2024-11-18 22:42:11
国外
2024-11-18 22:00:10
国外
2024-11-18 21:23:46
国外
2024-11-18 21:23:46
基因表达调控基本特点
2024-07-19 14:50:50
ELISA酶联免疫吸附试验实验标准曲线
2024-03-28 16:06:29
ELISA酶联免疫吸附试验结果分析
2024-03-28 13:44:05
ELISA原理、操作以及注意事项
2024-03-26 17:21:23
QPCR目的和意义
2024-01-15 17:36:24
核质分离实验QPCR数据处理
2024-01-15 15:05:16
QPCR数据分析以及作图方法
2024-01-11 14:23:33
QPCR实验设计【QPCR实验外包】
2024-01-10 17:03:29
QPCR原理和主要的三个步骤
2024-01-09 17:37:18
QPCR原理以及数据处理
2024-01-05 14:09:57
QPCR检测实验详细的步骤与报告（三）
2024-01-05 13:07:01
QPCR检测实验详细的步骤与报告（二）
2024-01-04 17:05:09
QPCR检测实验详细的步骤与报告(一）
2024-01-04 13:48:46
QPCR检测的是什么？
2024-01-03 17:34:53
WB检测实验报告和详细的操作步骤（下）
2023-12-21 14:42:54
WB检测实验报告和详细的操作步骤（中）
2023-12-21 13:36:16
WB检测实验报告和详细的操作步骤(上)
2023-12-20 16:36:30
什么是western blot？
2023-12-20 14:22:03
PCR设计引物的具体步骤【科研干货】
2023-11-17 13:59:50
引物设计的依据【小白适用】
2023-11-16 14:40:06
qPCR引物设计流程【一文搞懂】
2023-11-16 13:11:45
如何巧妙设计引物？
2023-11-14 17:29:47
关于SNP检测流程和应用
2023-03-29 11:24:18
做酶联免疫吸附剂测定实验需要注意什么？
2023-03-27 16:28:08
实时荧光定量 PCR（qPCR）的介绍
2023-03-20 13:08:33
WB实验检测介绍——检测小鼠组织中GSTM2的表达
2023-03-17 14:12:46
WB实验原理及流程图
2023-03-16 16:25:48
亚硫酸氢钠测序（BSP）实验步骤【BSP外包】
2022-11-22 15:00:00
什么是亚硫酸氢钠测序？【甲基化检测外包】
2022-11-18 15:47:24
DNA染色法检测支原体操作步骤【支原体检测外包】
2022-11-04 10:39:27
培养法检测支原体操作步骤【支原体检测外包】
2022-11-04 10:22:06
PCR检测支原体操作步骤【支原体检测外包】
2022-11-03 17:25:02
支原体检测方法大全【支原体检测外包】
2022-11-02 17:03:33
什么是支原体检测？【支原体检测外包】
2022-10-27 17:48:46
SNP检测常见问题答疑下篇
2022-08-09 19:14:35
SNP检测常见问题答疑上篇
2022-08-09 11:24:24
直接测序法检测SNP详解——最常用的方法
2022-08-05 08:58:37
Taqman探针法检测SNP分型详解
2022-08-04 15:12:43
SNP检测方法总结，有你用过的吗？
2022-08-02 17:56:41
SNP/单核苷酸多态性检测最常用的三种方法
2022-08-02 15:23:47
什么是SNP/单核苷酸多态性？
2022-08-02 14:16:49
实时荧光定量PCR实验技术答疑
2022-07-28 13:55:45
实时荧光定量PCR常见问题及解决方法
2022-07-27 17:12:19
荧光定量PCR实操注意事项，注意避雷！
2022-07-27 11:49:18
荧光定量PCR结果分析解读—荧光定量PCR外包
2022-07-26 11:17:27
荧光定量PCR实验操作步骤，你做对了吗？
2022-07-25 17:11:08
什么是实时荧光定量PCR？
2022-07-22 10:18:49
六种甲基化检测方法【附视频教程】
2022-05-16 17:09:40
DNA甲基化实验操作步骤
2022-05-13 11:52:54
DNA甲基化实验介绍【科研小白】
2022-05-13 10:27:04
ELISA酶联免疫吸附实操作常见问题处理方法【干货满满】
2022-04-08 16:34:54
ELISA酶联免疫吸附实验操作常见问题答疑【附视频教程】
2022-04-07 17:30:33
ELISA酶联免疫吸附实验操作注意事项【附视频教程】
2022-04-07 16:07:13
ELISA酶联免疫吸附实验详细操作步骤【附视频教程】
2022-04-07 13:27:43
科研小白看的ELISA酶联免疫吸附实验简介与原理【附视频教程】
2022-04-06 16:01:15
高分文章都怎么研究m6A甲基化
2022-01-10 14:50:24
DNA甲基化提高癌细胞对EGFR抑制剂敏感性的原因
2021-10-27 00:29:41
高分文章研究RNA甲基化详细步骤
2021-10-26 17:19:51
m6A甲基化研究思路设计方法
2021-10-26 15:44:54
Nature子刊 | DNA甲基化 甲基转移酶异位靶向拟南芥中CG
2021-05-27 17:59:59
实时荧光定量PCR检测步骤和注意事项【附视频教程】
2021-04-26 21:06:57
甲基化检测的几种方法和实验流程【附视频教程】
2021-04-23 11:19:00
细胞因子检测方法怎么选？常用检测方法优缺点整理
2021-04-12 15:25:26
这是我见过的WB结果图最多的文章！【文献解读】
2020-12-17 15:53:24
如何搞定Western Blot中的“奇葩”条带【干货文章】
2020-12-11 15:32:22
免疫沉淀及Pulldown这些方法原理你了解多少【新手入门】
2020-12-11 15:01:28
WB实验技术介绍【新手入门】
2020-12-11 14:59:38
实验介绍
taqman探针法：针对染色体上的不同SNP位点分别设计PCR引物和TaqMan探针，进行实时荧光PCR扩增。探针的5’-端和3’-端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。当溶液中存在PCR产物时，该探针与模板退火，即产生了适合于核酸外切酶活性的底物，从而将探针5’-端连接的荧光分子从探针上切割下来，破坏两荧光分子间的PRET，发出荧光。通常用于少量SNP位点分析。
高分辨率熔解曲线分析（HRM）是近几年兴起的SNP研究工具，它通过实时监测升温过程中双链DNA荧光染料与PCR扩增产物的结合情况，来判断是否存在SNP，而且不同SNP位点、是否是杂合子等都会影响熔解曲线的峰形，因此HRM分析能够有效区分不同SNP位点与不同基因型。这种检测方法不受突变碱基位点与类型的局限，无需序列特异性探针，在PCR结束后直接运行高分辨率熔解，即可完成对样品基因型的分析。该方法无需设计探针，操作简便、快速，成本低，结果准确，并且实现了真正的闭管操作。
图：某基因的SNP（G>A）进行HRM分析的结果。左图为熔解曲线，右图为差异图
SNaPshot法：是基于荧光标记单碱基延伸原理的分型技术，也称小测序，主要针对中等通量的SNP分型项目。在一个含有测序酶、四种荧光标记ddNTP、紧临多态位点5’-端的不同长度延伸引物和PCR产物模板的反应体系中，引物延伸一个碱基即终止，经ABI测序仪检测后，根据峰的移动位置确定该延伸产物对应的SNP位点，根据峰的颜色可得知掺入的碱基种类，从而确定该样本的基因型。对于PCR产物模板可通过多重PCR反应体系来获得。通常用于10-30个SNP位点分析（见下图）。
直接测序法：在所有SNP的检测方法中，对待检测片段进行直接扩增、测序是最为准确的方法，也是SNP分析的金标准。纯合型SNP位点的测序峰为单一峰型，而杂合型SNP位点的测序峰为套峰，因而很容易将其区分开来。通过直接测序方法进行SNP检测的检出率接近100%。该技术主要通过直接测序的方法来确定位点的基因型，这种分型方法准确性最高，但费用大。如果需要检测的几个SNP位点正好位于一个测序单元内(长度小于700bp)，则单个位点的分型费用可显著降低，这种分型技术不失为一种良好选择。对于准确性要求特别高或样本量特别小(几个或几十个)的项目，这种分型技术很适合。
【实验流程】
探针匹配：可以收集荧光；
探针不匹配：不能收集荧光。
案例展示
送检与交付标准
| 样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
|---|---|---|---|---|
| 动物组织 | 单个样品>0.1g，2mlEP管或冻存管装，不要过量；样本应尽量新鲜，如不能立即提取蛋白或核酸，应液氮速冻后冻存于-80℃或更低，冻存样本避免反复冻融以致降解 | -80℃ | 干冰 | 所有样本均须有唯一标记，且标记清晰可识 |
| 种子样本 | 去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本，单个样品>0.2g。 | -80℃ | 干冰 | |
| 贴壁/悬浮细胞 | 1. 总RNA或蛋白：106cell/指标、浆/核RNA或蛋白：107cell/指标、线粒体RNA或蛋白：2*107 cell/指标，样本尽量新鲜，细胞收取后直接加Trizol（QPCR检测）或直接冻存于-80℃ 2. 若细胞处理（加药、转染、感染）后状态差应酌情加大收样量 | -80℃ | 干冰 | |
| 全血/血清样品 | 用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓 1~3ml； -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。 | -80℃ | 干冰 | |
| 石蜡包埋样品 | 由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块，有效厚度大于 0.1cm； 新鲜的 FFPE 组织切片，每片厚度不超过 10μm，2~8 张，表面积不超过 250mm2。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 抗体 | 1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体； 2. 按抗体说明书要求寄送，尽量避免分装；如分装，确保量足够进行实验，并提供抗体说明书。 3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记，抗体的量应大于实验所需的量。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 引物 | 干粉，≥1OD，如进行预实验，每个基因至少提供两对引物， 附带公司引物合成单。 | -20℃ | 冰袋或常温 |
电话：400-691-6686
在线时间：8:00-24:00
微信关注公众号
湘公网安备