大家好，今天普拉特泽生物跟大家一起学习的是荧光定量PCR实验结果的分析与解读，上期我们学习了荧光定量PCR实验的操作步骤，不记得的可以点击回去复习哦。普拉特泽生物表达检测平台专业承接荧光定量PCR实验外包与代做服务，本文我们就来一点一点看，荧光定量PCR结果到底应该如何分析与解读。

        1、基线

        基线是指实时PCR反应的基线是指在PCR的初始循环期间的信号水平，通常是3至15的循环之间，此时荧光信号几乎没有变化。此时低信号可以认为是背景或反应的“噪音”。基线应该设置应考虑，在消除早期扩增循环中背景的同时，不覆盖掉明显非背景的扩增信号。当比较不同的qPCR反应或实验时，应定义同一基线。

        2、阈值

        qPCR的阈值代表的是明显超出基线的扩增信号水平，用以区分明确的扩增信号和背景。通常，qPCR仪器自带软件会自动将阈值设置为基线荧光值标准偏差的10倍。

        3、CT

        Ct是指荧光信号超过阈值时对应的循环数。Ct值与目的基因的起始量成反比，可用于计算DNA初始拷贝数。随着模板量减少，检测到显着扩增时的循环数会增加。

        4、扩增曲线

        扩增曲线 早期循环中，荧光信号几乎没有变化。随着反应的进行，每个循环的荧光水平开始显著上升，被称为指数期。一般在在指数期的早期阶段而不是后期的平台期进行定量分析。在指数阶段开始时，所有的试剂仍然是过量的，DNA聚合酶仍然高效，并且扩增产物量还较低，不会在退火时与引物竞争。这些因素都有助于更准确的定量。

        5、溶解曲线

        熔解曲线 熔解曲线描绘了随着反应温度升高，掺入染料分子的dsDNA解离成单链DNA（ssDNA）时的荧光变化。例如，当结合SYBR™ Green I染料的dsDNA被加热时，达到解链温度（Tm）后，由于双联DNA链解离而释放出染料，荧光信号会急剧降低。以荧光信号随时间变化作图可得到图3A，然后以ΔF/ΔT（荧光变化/温度变化）值与温度作图，可得到熔融动力学的清晰视图（图3B）。可以根据熔解曲线来判断qPCR反应的特异性，特异性的扩增的溶解曲线会是一个紧密的单峰。

        6、相对定量

        相对定量，不像绝对量化严格，应用于大多数基因表达水研究。相对定量关注的并非某个基因的绝对表达量，而是同一基因在样本间的表达差异(如实验组和对照组)。结果以处理组相对于未处理组的表达差异倍数表示。这种分析方法不需要测定精确的拷贝数，重点是在与未处理样品组相比的表达变化上。

        相对定量算法—ΔΔCt ΔΔCt方法是比较组别间同一基因表达差异的常用方法。通过将目的基因Ct(Ct 目的)与自身内参Ct值（Ct 内参）进行比较，可得到每一组别的ΔCt，再将实验组与对照组进行计算得到ΔΔCt。ΔΔCt的大小关联目的基因表达水平的倍数差异大小。

        倍数差异 = 2–ΔΔCt

        ΔCt 实验组 – ΔCt 对照组 = ΔΔCt

        Ct 目的 实– Ct 内参 实 = ΔCt 实验组

        Ct 目的 对– Ct 内参 对照 = ΔCt 对照组

        好啦，实验结果的数据应该怎么分析以及数据的意义咱们就讲到这里啦，如果您还有更多的问题，欢迎您留言跟咱们的技术一起留言讨论，如果您需要荧光定量PCR实验代做与外包的服务，请一定记得您生物科研路上的好盟友——普拉特泽！

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