大家好~今天跟大家一起学习的是实时荧光定量PCR实验，普拉特泽生物跟大家一起从实验的介绍、实验步骤、操作注意事项、常见问题这四个方面跟大家一起学习，本篇及时实时荧光定量PCR的一个简单介绍，一起来看吧！

        实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。Real-timePCR是在PCR扩增过程中，通过荧光信号对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和Log模板的起始拷贝数存在线性关系，所以成为定量的依据。

        实时荧光定量PCR的原理是：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。

        实时荧光定量的检测方法主要是分为两种：SYBRGreenⅠ法和TaqMan探针法

        1、SYBRGreenⅠ法：

        在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。

        SYBR定量PCR扩增荧光曲线图

        PCR产物熔解曲线图（单一峰图表明PCR扩增产物的单一性）

        2、TaqMan探针法：

        探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。

        那么实时荧光定量PCR在实际的生活中有哪些应用呢？

        1、临床疾病诊断

        各型肝炎、艾滋病、禽流感、结核、性病等传染病诊断和疗效评价；地中海贫血、血友病、性别发育异常、智力低下综合症、胎儿畸形等优生优育检测；肿瘤标志物及瘤基因检测实现肿瘤病诊断；遗传基因检测实现遗传病诊断。

        2、动物疾病检测

        禽流感、新城疫、口蹄疫、猪瘟、沙门菌、大肠埃希菌、胸膜肺炎放线杆菌、寄生虫病等、炭疽芽孢杆菌。

        3、食品安全

        食源微生物、食品过敏源、转基因、乳品企业阪崎肠杆菌等检测。

        4、科学研究

        医学、农牧、生物相关分子生物学定量研究。

        好啦，那实时荧光定量PCR我们就简简单单的介绍到这里啦！下期跟大家分享实时荧光定量的PCR的操作步骤！如果您有实时荧光定量PCR实验外包的需求的话欢迎留言，我们会及时回复的哦！