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2024-11-18 22:00:13
国外
2024-11-18 21:26:13
实验介绍
【技术原理】
在分子克隆中,从大片段的克隆中选取特定小片段再克隆。就是初步克隆的外源片段往往较长,含有许多目的基因片段以外的DNA片段,将目的基因所对应的一小段DNA找出来。对已经获得的目的DNA片段进行重新克隆,其目的在于对目的DNA进行进一步分析,或者进行重组改造等。
【实验流程】
案例展示
送检与交付标准
样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
---|---|---|---|---|
动物组织 | 单个样品>0.1g,2mlEP管或冻存管装,不要过量;样本应尽量新鲜,如不能立即提取蛋白或核酸,应液氮速冻后冻存于-80℃或更低,冻存样本避免反复冻融以致降解 | -80℃ | 干冰 | 所有样本均须有唯一标记,且标记清晰可识 |
种子样本 | 去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本,单个样品>0.2g。 | -80℃ | 干冰 | |
贴壁/悬浮细胞 | 1. 总RNA或蛋白:106cell/指标、浆/核RNA或蛋白:107cell/指标、线粒体RNA或蛋白:2*107 cell/指标,样本尽量新鲜,细胞收取后直接加Trizol(QPCR检测)或直接冻存于-80℃ 2. 若细胞处理(加药、转染、感染)后状态差应酌情加大收样量 | -80℃ | 干冰 | |
全血/血清样品 | 用抗凝管保存的外周血 5~10ml,骨髓 1~3ml; -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl,每 400μl 加入 400μl Trizol。 | -80℃ | 干冰 | |
石蜡包埋样品 | 由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块,有效厚度大于 0.1cm; 新鲜的 FFPE 组织切片,每片厚度不超过 10μm,2~8 张,表面积不超过 250mm2。 | -20℃ | 冰袋 | |
抗体 | 1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体; 2. 按抗体说明书要求寄送,尽量避免分装;如分装,确保量足够进行实验,并提供抗体说明书。 3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记,抗体的量应大于实验所需的量。 | -20℃ | 冰袋 | |
引物 | 干粉,≥1OD,如进行预实验,每个基因至少提供两对引物, 附带公司引物合成单。 | -20℃ | 冰袋或常温 |