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2024-11-21 14:00:33
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2024-11-19 03:57:18
实验介绍
【技术原理】
核酸具有贮存和传递遗传信息等重要生物功能，是分子生物学研究的主要对象。采用常规吸附柱法抽提样本中的DNA、RNA，为下游实验提供高纯度和高浓度的模板。
DNA提取方法：对基因组DNA的提取方法主要有 CTAB，SDS和其他如玻璃珠法，酶法等。质粒DNA的提取主要有碱裂解法和煮沸法；线粒体，叶绿体DNA的提取主要有差速离心结合SDS法。
RNA提取方法：异硫氰酸胍/苯酚法。基本实验原理：细胞在变性异硫氰酸胍作用下裂解，核酸释放。DNA和RNA在特定pH下溶解度不同而分别于体系的中间相与水相，得以分离。进行有机溶剂抽提，沉淀，得到纯净RNA。
【实验流程】
交付标准
常见问题
【常见问题】
1、洗脱产物DNA量很少或没有
a、样品中细胞浓度低；
b、样品裂解不充分；
c、DNA吸附不充分。
2、DNA影响后续酶反应实验
a、乙醇有残留；空离完成后再将吸附柱置室温或温箱2min左右，彻底去除乙醇。
3、核酸降解
a、样本不新鲜（尤其对于RNA而言）；
b、前处理不当（样本量过大）。
送检与交付标准
| 样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
|---|---|---|---|---|
| 动物组织 | 单个样品>0.1g，2mlEP管或冻存管装，不要过量；样本应尽量新鲜，如不能立即提取蛋白或核酸，应液氮速冻后冻存于-80℃或更低，冻存样本避免反复冻融以致降解 | -80℃ | 干冰 | 所有样本均须有唯一标记，且标记清晰可识 |
| 种子样本 | 去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本，单个样品>0.2g。 | -80℃ | 干冰 | |
| 贴壁/悬浮细胞 | 1. 总RNA或蛋白：106cell/指标、浆/核RNA或蛋白：107cell/指标、线粒体RNA或蛋白：2*107 cell/指标，样本尽量新鲜，细胞收取后直接加Trizol（QPCR检测）或直接冻存于-80℃ 2. 若细胞处理（加药、转染、感染）后状态差应酌情加大收样量 | -80℃ | 干冰 | |
| 全血/血清样品 | 用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓 1~3ml； -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。 | -80℃ | 干冰 | |
| 石蜡包埋样品 | 由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块，有效厚度大于 0.1cm； 新鲜的 FFPE 组织切片，每片厚度不超过 10μm，2~8 张，表面积不超过 250mm2。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 抗体 | 1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体； 2. 按抗体说明书要求寄送，尽量避免分装；如分装，确保量足够进行实验，并提供抗体说明书。 3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记，抗体的量应大于实验所需的量。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 引物 | 干粉，≥1OD，如进行预实验，每个基因至少提供两对引物， 附带公司引物合成单。 | -20℃ | 冰袋或常温 |
电话：400-691-6686
在线时间：8:00-24:00
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