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实验介绍
【技术原理】
流式利用不同荧光物质标记的单克隆抗体，与待测成分作用，然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列，一个个迅速通过激光聚焦区，激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号，利用这些信号，可计算出相对含量，从而得到细胞群的相对比值。
细胞周期分为间期与分裂期两个阶段。间期又分为三期：即DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）与DNA合成后期（G2期）。某些细胞在分裂结束后暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，执行一定生物学功能（G0期）。由于细胞周期各时相的DNA含量不同，通常正常细胞的G1/ G0期具有二倍体细胞的DNA含量（2N），而G2/ M期具有四倍体细胞的DNA含量（4N），而S期的DNA含量介于二倍体和四倍体之间。PI可以与DNA结合，其荧光强度直接反映了细胞内DNA含量。因此，通过流式细胞仪PI染色法对细胞内DNA含量进行检测时，可以将细胞周期各时相区分为G1/G0期，S期和G2/M期。
【实验方法】
Step1：细胞培养
Step2：转染或药物处理
Step3：细胞收集
Step4：加周期试剂
Step5：上机检测
案例展示
在施加药物后，细胞周期明显阻滞。
技术总结
1、考虑到进行流式时需要用到对照组细胞设置空白组（用于调节电压）和单染组细胞（用于调节补偿），因此要求该组细胞量较其他组多；
2、如发现细胞密度偏低，细胞量较少，则适当增加离心时间。收集细胞时，应该连同上清一起收集，同时胰酶消化时间不宜过长，否则容易引起假阳性；
3、检测细胞经过转染等处理后可能会带有自发荧光，应注意选择凋亡试剂盒的颜色通道 如：带绿色荧光时，应选择7AAD试剂盒；
4、细胞铺板应选择细胞状态良好的时候进行，且避免因反复吹打形成机械损伤，而出现细胞碎片过多。
送检与交付标准
| 样品类型 | 样品需求 | 运输条件 |
|---|---|---|
| 组织 | 离体后组织制成单细胞悬液，加入PBS培养基内 | 常温运输 |
| 活细胞 | 样本量：1*106个细胞/TEST，加入PBS培养基内 | 常温运输 |
| 血液 | 将血液采集在EDTA肝素钠的抗凝采血管内 | 常温运输 |
电话：400-691-6686
在线时间：8:00-24:00
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