细胞凋亡检测实验操作过程中的常见问题及解决方法由普拉特泽生物给大家解答与分享，普拉特泽生物流式检测平台可承接各种流式检测外包服务，包括检测细胞凋亡、细胞增殖、细胞周期等实验外包服务，本文是我们在承接数百例细胞凋亡检测实验中，对操作过程中的常见问题与大家留言咨询最多的问题进行回答与建议，快来收藏吧！

   Question 1：用流式检测细胞凋亡和用Tunel染色检测细胞凋亡，为什么细胞的凋亡率不一样？Tunel测出来的死亡率特别高，怎么破？

   A：客观来说，用不同的试验方法来检测细胞凋亡哪怕是同一批样本、同一个人操作也可能会因为时间温度、样本污染、操作不当等问题造成结果上相应的偏差，但是不会太大。Tunel染色检测的是凋亡最晚期的DNA片段化，而且在Tunel检测过程中，把操作损伤的细胞和坏死的细胞也当做了凋亡细胞，如果最后的结果数据是用的肉眼来看的话也会有经验判断上的误差，所以Tunel检测细胞凋亡时凋亡率高一点是正常的。这两种方法结果不同的造成原因实在是有太多的不确定性了，如果你也是有相同的问题，可以给客服留言将详细的实验过程描述出来，方便技术人员回复~

   Question 2：收集准备检测细胞凋亡的样本时，贴壁细胞做流式前用细胞刮好还是用胰酶消化下来比较好？

   A：胰酶对细胞的伤害确实挺大的胰酶属于异种蛋白酶，可以将细胞膜上和培养皿结合的蛋白质降解，对细胞也有伤害，我们实验室对不同的细胞有不同的消化方式，贴壁细胞也有多种，区别对待所以不同的细胞样本有不同的取样方法，如果是贴壁能力很强的细胞胰酶也很难消化下来，还是用细胞刮比较好，正常操作就细胞不会损伤很多。

   Question 3：冷冻保存后的组织切块再做流式会不会对结果有什么影响？

   A：会，而且影响很大。流式细胞仪检测细胞需要细胞活性好、单个分散，这样才方便实验过程中区分死亡、凋亡和正常细胞，组织在冻存、解冻后会有大量细胞死亡、细胞活性下降、粘连破碎等问题，无法再上机检测。流式检测最好是用新鲜的刚取材的样本进行检测，数据准确，操作方便。

   Question 4：用Tunel测细胞样本时荧光信号弱或者没有荧光信号，是染色没染上吗？

   A：不一定，如果确定细胞或组织是出处于凋亡的状态，我们要注意的是：操作时样本切片切得薄一点，方便染色；脱蜡和水化时如果不充分也会影响染色液上色；切片不新鲜也会影响染色效率，和做流式检测一样尽量选择新鲜的切片；荧光易碎灭，所以操作时要观察快速且避光。

   Question5：用的Tunel染色检测细胞凋亡时荧光的背景很强，怎么解决呢？

   A：荧光背景过强影响结果的观察的话可能是因为Tunel染色的时间过长或染色液浓度太高，适当的降低或减少浓度和染色时间一般会有所缓解。如果没有缓解的话可以适当调整曝光的条件，将阴性对照组地背景光调到无，然后用这个曝光的条件去拍摄实验组。
   好啦，那么关于细胞凋亡检测的详细实验步骤、实验注意事项以及操作过程中的常见问题和解决方法我们就全部介绍完了，不记得的同学链接奉上，记得要温故而知新哦。

《流式检测细胞凋亡实验原理与步骤》

《流式检测细胞凋亡操作注意事项》

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