大家好！今天普拉特泽生物照常跟大家一起学习新实验——活性氧（ROS）检测！活性氧（ROS）是含氧的化学反应性化学物质，活性氧检测一案板可以通过燃亮染色后病理观察或者用流式的方法进行检测。普拉特泽生物流式检测平台承接活性氧检测多例，在对样本的检测与方法上都有专业的评估标准，本文就跟大家一起简单聊聊什么是活性氧检测~

  氧是生命运动过程中不可缺少的一种气体，人们一旦处于缺氧或者供氧不足的环境中，就会感到憋气的痛苦甚至死亡。所以，自从发现氧以来氧一直被人们认为是一种对人体百益而无一害的气体。可是生命科学迅速发展的今天，人体内的各种器官随着年龄增大而不断老化促使科学家们在各个领域探索原因与机制，1969年McCord与Fridovich发现在生化反应过程中o获得一个电子还原生成超氧自由基(0))进而经过红血球的分离精制后获得0的清除灭活酶并命名为超氧化物歧化酶，激发了大批的科学研究者致力于o，的生成过程、反应活性、毒性、生理和病理等方面的研究。同时由0，衍生出来的过氧化氢(HO)羟自由基(OH)激发态氧(一重态氧或称单线态氧0)也受到了人们的重视。

  那么活性氧检测有什么意义呢？

  活性氧是生命活动中不可缺少的活性物质，自由基在体内可提高一些酶的活性，如核苷酸的合成和肝脏的解毒过程中，自由基可激活某些合成酶或解毒酶。自由基还参与机体内一些活性物质如前列腺素的合成。炎症过程中，自由基可促进炎性细胞吞噬细菌和杀死细菌，如中性粒细胞发生呼吸爆发时产生大量自由基，可杀死病原体。

       ROS更多被喊予明确的病理意义，ROS可对细胞膜结构，核酸和蛋白分子产生氧化作用，引起其结构和功能障碍。ROS增多导致机体氧化应激反应(Oxidative Stress)造成细胞损伤，参与多种病理机制。百种以上的疾病状态都可能有ROS的参与。机体通过一系列抗氧化机制，维持ROS的平衡，如超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase.SOD)、过氧化氛酶(Catalase)等酶类和一些小分子还原物质，可去除细胞生成的ROS。检测细胞ROS的含量，可以了解ROS在细胞一些生理和病理状态中的变化，分析药物效应和相关机制，由于ROS在体内存在的半意期很短，仅为15秒左右，需要用敏感的方法对其进行检测，常用的ROS测定方法包括luminol及其它化合物与氧自由基的化学发光反应、ROS的电子自旋共振(electron spin resonance,ESR)测定，和自由基反应性荧光染料的测定方法。

  我们最常用的方法是化学发光法，化学发光测定法是仪器分析中灵敏度最高的方法之一，它的特点是化学反应与发光现象同时发生，从而有望成为不稳定化合物的在线、原位分析的有效手段。

  化学发光研究也是活性氧测定法研究领域中比较活跃的分支之一，特别是针对H₂O₂测定，有许多灵敏度高、选择性好的化学发光体系。进年来，在HO2测定方面开发了一系列高灵敏度的化学发光分析法，除此之外，目前比较成功的活性氧化学发光测定法主要有鲁米诺(Luminol)法、光泽精法(Lucioenin)和甲壳动物荧光素(Cvpridina)法等。

  再就是和自由基反应性染料的测定方法，常用的是DCFH-DA。DCFH-DA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜。进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不会通透细胞膜，因此探针很容易被积聚在细胞内。细胞内的活性氧能够氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。绿色荧光强度与活性氧的水平成正比。在最大激发波长480 nm，最大发射波长525 nm处，使用荧光显微镜，流式细胞仪或激光共聚焦显微镜等检测荧光信号。Rosup为活性氧阳性诱导药物，根据其荧光信号强度，可分析活性氧的真正水平。

        好啦，那关于活性氧检测的介绍小编就介绍到这里啦，后面两期给大家详细分下化学发光法和荧光法（和自由基反应性染料检测法）的详细操作步骤，如果您对活性氧检测的检测方法有什么疑问或有活性氧检测外包的需求，欢迎随时留言与技术讨论~