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2024-05-13 15:30:05
实验介绍
【应用简介】
肿瘤细胞/癌细胞的耐药性是肿瘤/癌症难以根治的重要原因。体外构建的耐药细胞株，能模拟肿瘤细胞/癌细胞对特异药物耐药性的形成过程，有助于人们理解肿瘤细胞/癌细胞获得耐药性的机制，筛选获得抗耐药性的特异药物，并对相关疾病进行有针对性地临床治疗。
【原理介绍】
一种药物作用于某类细胞后，会杀死其中没有抗性的细胞，而这类细胞中具有抗性的细胞不会被杀死，即进行了选择。具有抗性的细胞大量繁殖产生很多抗性后代，再用这种药物时表现出的药效大大下降的现象就是细胞的耐药性。采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击方法诱导肿瘤细胞对特定药物产生耐药性，从而构建出对特定药物产生耐药性的肿瘤细胞株。
【实验方法】
1、体外低浓度梯度递增联合大剂量尖端冲击方法诱导细胞的耐药性；
2、MTT法测定药物对清本细胞和耐药细胞的IC50，计算耐药指数。
案例展示
人卵巢癌细胞A2780
技术总结
将对数生长期的细胞接种于培养瓶中，生长至70%～80%汇合时，将处于对数生长期的肿瘤细胞置于含有指定药物浓度的培养液中培养一段时间。弃去培养液，PBS清洗2遍，更换不含药物培养基，常规培养。待细胞稳定生长、进入对数生长期后，传代两次，再将筛选出的细胞在指定浓度的药物浓度培养液中继续培养。依次不断改变作用时间，经过约6-12个月的培养，最终使得细胞能够在一定浓度的药物的培养液中持续稳定生长并传代，然后脱药培养1个月在检测细胞的生物特性及耐药指标。
浓度梯度递增间隙作用：采用药物浓度递增培养法冲击诱导，对数生长期的细胞接种于培养瓶中，细胞处于60～70%浓度对数期生长时，加入起始浓度为低浓度的药物作用24 h，之后弃去培养液，PBS清洗2遍，更换不含药物培养基。等细胞恢复生长后，消化传代到低浓度培养基中作用细胞24 h。待细胞增殖至正常形态后，重复上述药物冲击，每种浓度冲击8次。待细胞在此浓度稳定生长后，提高药物浓度继续培养，药物依次递增浓度加药。药物诱导历时大约9个月，直到细胞能够在指定浓度的药物中稳定生长。
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