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实验介绍
【应用简介】
成球能力是肿瘤干细胞体外鉴定的一个重要方法，其判断的是单个细胞在合适的条件培养基自我更新的能力，一般用细胞球形成效率表示。对于某些肿瘤如胶质瘤和乳腺癌，它们的肿瘤干细胞在体外条件培养时相对较容易形成细胞球，而另一些上皮肿瘤如肝癌、结肠癌等则相对成球困难些。
【技术原理】
肿瘤干细胞能分化出不同表型，具有不断自我更新和分化能力，在添加了生长因子的无血清培养基中能培养形成细胞球。
【实验方法】
Step1：细胞培养；
Step2：细胞转染或药物处理；
Step3：将细胞接种于超低粘附培养板中，以成球培养基培养；
Step4：图片采集。
案例展示
处理组细胞成球较对照组小，说明该处理因素能抑制细胞成球。
技术总结
在细胞成球实验过程中需配制成球专用培养基，所用细胞培养板为超低黏附培养板。细胞接种密度需要自己摸索。低密度常用于原代肿瘤干细胞的提取，筛选可以非粘附生长的细胞。高密度用于细胞球的扩增，一般来说5000/ml以上。培养过程中无需换液，隔2-3天补液即可。
送检与交付标准
| 样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
|---|---|---|---|---|
| 冻存细胞 | 1.取对数生长期的细胞，消化离心收集细胞，加入冻存液吹打混匀，装入冻存管，标明细胞名称/细胞代数，冻存细胞数量在1-5*106个/ml。 2.项目启动后细胞复苏，复苏后3天反馈细胞状态，3-5天反馈细胞污染情况，5-7天反馈支原体污染情况。 3. 细胞详细信息（名称、培养基和其他培养条件等，如经过特别处理需告知并提供必要的信息） | 液氮 | 干冰 | 所有样本均须有唯一标记，且标记清晰可识 |
| 复苏后细胞 | 1.使用T25培养瓶运输。细胞汇合度达到60%以上，装满培养液，只留纽扣大小的气泡，瓶口用封口膜封好，标明细胞名称/细胞代数/接种时间/培养基类型，瓶子固定运输。 2.收到细胞后3天反馈细胞状态，3-5天反馈细胞污染情况，5-7天反馈支原体污染情况。 3. 细胞详细信息（名称、培养基和其他培养条件等，如经过特别处理需告知并提供必要的信息） | 常温 | 常温 | |
| 质粒 | 1.纯度高，无内毒素，无蛋白质，基因组DNA/RNA污染，质粒A260:A280的比值在1.8-2.0之间 2.浓度不低于0.5μg/μl，总量大于100μg，无内毒素处理 3. 载体详细信息，包括名称、大小、抗性、荧光标记 | -20℃ | 冰袋 | |
| 病毒 | 1.慢病毒：滴度不低于1*108TU/ml，体积约200μl，标明制备时间，且没有反复冻融 2.腺病毒：滴度不低于1*109PFU/ml，体积约200μl，标明制备时间，且没有反复冻融 3.明确是否表达荧光标签蛋白及其种类，最好需要提供病毒载体图谱； | -80℃ | 干冰 |
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