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实验介绍
【应用简介】
核酸和蛋白质是组成生命的主要物质，研究细胞内RNA与蛋白结合情况，可以了解转录后调控网络的动态过程，帮助我们发现的miRNA的调节靶点，RIP检测实验是应用于蛋白与RNA互作关系的重要参考。
【技术原理图】
【实验方法】
第一步：细胞裂解液的制备
第二步：磁珠与抗体的准备
第三步：RNA结合蛋白免疫沉淀
第四步：用蛋白酶ķ对RNA-蛋白复合物进行消化
第五步：RNA纯化
第六步：对结合在复合物上的RNA反转录，合成cDNA
第七步：Q-PCR验证RNA
案例展示
技术总结
【常见问题】
1、经过免疫沉淀后的RNA浓度过低；
2、Input组目的条带无扩增；
3、RNA纯度未在1.8-2.1之间；
4、阴性对照IgG反应中有目的条带。
【注意事项】
1、RIP反应体系中的试剂和抗体中均需保证无RNA酶；
2、细胞样本的数量较大，应按照所需要求提供细胞样本数量；
3、选购的相应的抗体应达到IP实验级别，并通过阴性实验反馈结果可信性。
送检与交付标准
| 样品类型 | 样品需求 | 保存条件 | 运输条件 | 备注 |
|---|---|---|---|---|
| 动物组织 | 单个样品>0.1g，2mlEP管或冻存管装，不要过量；样本应尽量新鲜，如不能立即提取蛋白或核酸，应液氮速冻后冻存于-80℃或更低，冻存样本避免反复冻融以致降解 | -80℃ | 干冰 | 所有样本均须有唯一标记，且标记清晰可识 |
| 种子样本 | 去壳新鲜或保存于液氮中的的种子样本，单个样品>0.2g。 | -80℃ | 干冰 | |
| 贴壁/悬浮细胞 | 1. 总RNA或蛋白：106cell/指标、浆/核RNA或蛋白：107cell/指标、线粒体RNA或蛋白：2*107 cell/指标，样本尽量新鲜，细胞收取后直接加Trizol（QPCR检测）或直接冻存于-80℃ 2. 若细胞处理（加药、转染、感染）后状态差应酌情加大收样量 | -80℃ | 干冰 | |
| 全血/血清样品 | 用抗凝管保存的外周血 5~10ml，骨髓 1~3ml； -80℃保存不超半周的白细胞匀浆>400μl，每 400μl 加入 400μl Trizol。 | -80℃ | 干冰 | |
| 石蜡包埋样品 | 由标准的石蜡包埋盒包埋的石蜡块，有效厚度大于 0.1cm； 新鲜的 FFPE 组织切片，每片厚度不超过 10μm，2~8 张，表面积不超过 250mm2。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 抗体 | 1. 按样本种属提供满足相应实验要求的抗体； 2. 按抗体说明书要求寄送，尽量避免分装；如分装，确保量足够进行实验，并提供抗体说明书。 3.保存抗体的抗体管上应有能够识别此抗体的标记，抗体的量应大于实验所需的量。 | -20℃ | 冰袋 | |
| 引物 | 干粉，≥1OD，如进行预实验，每个基因至少提供两对引物， 附带公司引物合成单。 | -20℃ | 冰袋或常温 |
电话：400-691-6686
在线时间：8:00-24:00
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