ELISA实验常见问题解答由普拉特泽生物技术为大家总结分享。本文是关于ELISA实验的最后一篇介绍，前面我们学习了什么是ELISA实验？、ELISA实验步骤详解、快速解读ELISA实验结果以及ELISA实验注意事项及处理的上篇，可以点击标题直接传送回去学习的哦。普拉特泽生物表达检测平台承接ELISA实验外包上百例，现在我们就来看看，ELISA实验常见问题解答！

前期回顾：

什么是ELISA实验？

ELISA实验步骤详解

快速解读ELISA实验结果

ELISA实验注意事项

ELISA（Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay），即酶联免疫吸附检测，是一种广泛应用于生物学和医学领域的免疫酶技术。它利用抗原抗体的特异性反应，对样本中可溶性目的产物进行定量检测。然而，在ELISA实验过程中，可能会遇到各种问题，本文将解答一些常见问题，帮助你更好地进行ELISA实验。

一、样本准备和处理

1. 样本如何保存？

样本的保存对实验结果至关重要。一般来说，在5天内检测的血清样本可放置于4°C，若超过一周则需冻存于-20°C或更低温度。样本在冰箱中保存时间过长会导致血清IgG聚合，影响实验结果。此外，反复冻融会使蛋白效价降低，因此建议少量分装冻存。

2. 血清标本采集应注意什么？

采集血清标本时，应避免溶血，因为红细胞溶解会释放具有过氧化物酶活性的物质，导致非特异性显色。同时，抗凝不完全的血浆标本因纤维蛋白原的干扰可能造成假阳性，建议尽量不用抗凝血，尤其是肝素抗凝血。

二、实验步骤和操作

1. 抗体非特异性结合怎么办？

抗体非特异性结合是ELISA实验中常见问题之一。首先，应确保板孔进行了封闭，并使用恰当的封闭液以防止非特异性结合。其次，应根据说明书的推荐量使用抗体，避免抗体量过多导致非特异性结合。

2. 酶标板洗涤不彻底如何处理？

洗涤是ELISA实验中至关重要的步骤，不彻底的洗涤会导致非特异性结合物质残留，影响实验结果。洗板前应将抗体溶液倒干净，然后用清洗液倒满板孔，确保能充分洗涤。手工洗板时，拍板要垂直，避免交叉污染；使用半自动洗板时，应经常检查冲洗头是否通畅。

3. 孵育时间和温度如何控制？

孵育时间和温度是影响ELISA实验结果的重要因素。最常用的孵育温度为37℃，孵育时间一般为1-2小时。孵育时应贴封片或加盖，避免样品或稀释液蒸发。同时，应严格控制孵育时间，避免因时间过长导致非特异性结合。

三、试剂和仪器

1. 试剂被污染怎么办？

试剂被污染会导致实验结果不准确。如果怀疑试剂被污染，应立即更换新的试剂。此外，在加样和洗涤过程中要小心操作，避免相邻孔之间溶液溅洒出现交叉污染。

2. 酶标仪如何正确使用？

酶标仪是ELISA实验中常用的检测仪器。在使用前，应确保酶标板清洁，并调整酶标仪的波长至合适位置。单波长读板时，一般选择对显色具有最大吸收的波长，如450nm或492nm；双波长读板时，则是敏感波长下的吸光值与非敏感波长下的吸光值之差，以排除板内脏物的影响。

四、结果分析

1. 标准曲线如何拟合？

标准曲线的拟合是ELISA实验结果分析的重要步骤。标准品浓度和相应的吸光度（OD）值如果能够呈现直线关系是最理想的，但实际情况中往往呈现“S”型曲线关系。此时，应选择合适的拟合方法，如Logistic曲线拟合或四参数逻辑拟合，以精确反映浓度和吸光度的曲线关系。

2. 测定结果偏低或偏高如何处理？

测定结果偏低或偏高可能由多种原因造成，如样品中待测抗原含量太低、抗体量不合适、孵育时间不足等。针对这些问题，可以尝试增加样品使用量、调整抗体量、延长孵育时间等方法来改善实验结果。

五、总结

ELISA实验虽然灵敏度高、特异性强，但在实验过程中仍可能遇到各种问题。通过严格控制样本准备和处理、规范实验操作、正确使用试剂和仪器，以及合理分析实验结果，可以大大提高ELISA实验的准确性和可靠性。希望本文的解答能够帮助你更好地进行ELISA实验，解决你的所有疑惑。

如果你总是在做实验时总会遇上这样那样的问题需要帮助时，请记得在ELISA实验中遇到技术问题可添加技术微信：18570028002

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