双荧光素酶报告系统（Dual-Luciferase Reporter Assay System）是一种在生物学研究中广泛应用的技术，也是近些年生物学研究的热门研究工具之一。普拉特泽生物实验室已经承接双荧光素酶实验上百例；可外包更多分子检测实验让我们从系统原理、组成、主要应用、实验流程、优势及局限性等方面进行介绍一下吧~
基本原理
荧光素酶反应：荧光素酶是一类能够催化荧光素发生氧化反应并发出荧光的酶。在双荧光素酶报告系统中，常用的是萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）和海肾荧光素酶（Renilla Luciferase）。萤火虫荧光素酶可以催化荧光素在 ATP、镁离子等存在的条件下与氧气发生反应，产生黄绿色荧光；海肾荧光素酶则催化腔肠素与氧气反应，产生蓝色荧光。

报告基因的应用：将感兴趣的基因的调控元件（如启动子、增强子等）与荧光素酶基因构建成报告基因载体。当这些调控元件受到细胞内各种因素的影响时，会调控荧光素酶基因的表达，进而通过检测荧光素酶的活性来反映调控元件的活性以及相关基因的表达情况。在双荧光素酶报告系统中，通常会同时使用两种荧光素酶，一种作为实验报告基因，另一种作为内参报告基因，用于校正实验误差。

系统组成

报告基因载体

基因转录调控研究：可以用于确定特定基因的启动子区域中是否存在特定转录因子的结合位点，以及这些转录因子对基因转录的激活或抑制作用。

miRNA 功能研究：通过将 miRNA 的靶基因的 3'UTR 区域克隆到荧光素酶基因的下游，构建报告基因载体。若 miRNA 能够与靶基因的 3'UTR 结合，会导致荧光素酶基因的表达受到抑制，荧光信号减弱，从而验证 miRNA 与靶基因的相互作用。       

药物研发：在药物研发过程中，可用于筛选能够调节特定基因表达的药物分子。也可以评估药物对细胞信号通路的影响，为药物的作用机制研究提供依据。
实验流程

细胞转染：将构建好的萤火虫荧光素酶报告基因载体和海肾荧光素酶内参载体共转染到目标细胞中。可以使用脂质体转染试剂、电穿孔等方法将载体导入细胞。