RNA pull-down实验原理介绍+实验步骤
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
大家好!今天普拉特泽生物继续带大家一起学习新实验——RNA pull-downll实验,RNA pull-down实验是一种用于寻找RNA靶标的实验方法,它
结合了RNA杂交技术和亲和层析技术。普拉特泽生物病理实验平台长期为大家提供RNA pull-down实验代做外包服务,本文跟大家分享RNApull-down实验原理介绍+实验步骤:
该实验的主要原理是利用一种与目标RNA互补的DNA探针固定在琼脂糖珠上,通过混合样品中的RNA和蛋白质来鉴定RNA的结合伴侣。
具体步骤如下:
1. 在实验前制备好具有生物学意义的RNA分子,并根据需要对其进行修饰或标记。
2. 将RNA与DNA探针情况下进行热变性,然后快速冷却,以便DNA可以与RNA形成完整的双链结构,这个过程被称为RNA逆转录合成。
3. 将RNA-DNA卡特兰复合物添加到琼脂糖珠中,并通过旋转等手段使其定时摇动以保证孵育的均匀性。
4. 导入含RNA和蛋白质的细胞裂解液,将孵育液孵育24-72小时,使这些蛋白质与靶RNA结合。
5. 通过洗涤去除未结合的蛋白质,还原RNA-DNA复合物,从而使靶RNA单链从DNA探头上解离,这部分是拉下(pull-down)步骤。
6. 将洗涤过程中留下的蛋白质分离、纯化,并通过蛋白质分析技术进行分析。
总之,RNA pull-down实验是一种简单有效的技术,可用于确定RNA结合伴侣,发现潜在的RNA功能以及了解它们与蛋白质相互作用的方式。
(附RNA pulldown实验案例图)
好啦,RNA pull-down实验原理和步骤我们就简单介绍到这里啦,同学们有没有一个简单的了解呢?不懂得可以给客服留言技术给您详细解
答。下一篇再详细为大家介绍检测RNA pull-down实验结果的分析,普拉特泽生物誓让大家透彻学习RNA pull-down实验。当然若果您有RNA pull-down实验或其他医学科研实验外包的需求,欢迎随时咨询哦。