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实验介绍
【技术原理】
利用不同荧光物质标记的单克隆抗体，与待测成分作用，然后上流式细胞仪检测待测细胞。待测细胞随流动室内的流动鞘液排列成单列，一个个迅速通过激光聚焦区，激光在对每个细胞进行照射时可同时得到前向角散射和侧向角散射2种散射光以及激发荧光标记物发出的信号，利用这些信号，可计算出相对含量，从而得到各细胞群的相对比值。
我们常用的检测指标为
间充质干细胞（MSCs）： 表达CD73\CD90\CD105\CD44，不表达CD45\CD34\CD14\CD11b\CD19\HIL-DR
肿瘤干细胞（CDCs）：CD24\CD44\CD133\CD271\CD304\CD326
【实验流程】
Step1：制成单细胞悬液（组织样本）
Step2：溶血（细胞样本无需进行此步骤）
Step3：离心去上清
Step4：调整细胞密度
Step5：加入相应的标记抗体
Step6：孵育
Step7：洗涤后离心去上清
Step8：上机检测
注意事项
国际细胞治疗协会间充质和组织干细胞委员会2006年提出了MSC鉴定的最低标准，关于细胞表型的要求是表达CD90， CD105和CD73，不表达CD45, CD34, CD14或CD11b, CD79a或CD19和HLA-DR；阳性指标都需要染色，阴性指标一般选择2-3个指标，因为是做细胞表型鉴定，所以要配齐同型对照。为保证所得结果的可靠性，每次实验前应用标准荧光微球检测仪器的变异系数。每次应做阴性对照、阳性对照、质控对照、以确保将各种试剂及操作过程对结果的影响降至最低。
送检与交付标准
| 样品类型 | 样品需求 | 运输条件 |
|---|---|---|
| 组织 | 离体后组织制成单细胞悬液，加入PBS培养基内 | 常温运输 |
| 活细胞 | 样本量：1*106个细胞/TEST，加入PBS培养基内 | 常温运输 |
| 血液 | 将血液采集在EDTA肝素钠的抗凝采血管内 | 常温运输 |
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