一、M1和M2型巨噬细胞简介

巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2－3周，多用做原代培养，难以长期生存。

巨噬细胞是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。巨噬细胞和单核细胞皆为吞噬细胞，在脊椎动物体内参与非特异性防卫（先天性免疫）和特异性防卫（细胞免疫）。它们的主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用（即吞噬以及消化），并激活淋巴球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。

南京医科大学的杨硕教授报告了E3泛素连接酶Pellino3通过抑制TRAF6介导的泛素化和HIF1a的稳定来负向调节巨噬细胞向M1极化以及IL-1β的产生，最终降低胰岛素抵抗，阻止糖尿病发生的研究成果。值得注意的是，nature杂志最近发文证明了去除Treg细胞后可阻止衰老相关的肥胖、胰岛素抵抗以及糖尿病的发生发展。因此，慢性炎症在不同原因引起的二型糖尿病中的作用也可能是不一样。

事实上，巨噬细胞极化还可参与肿瘤、感染性疾病以及组织的损伤和修复等生理病理过程。巨噬细胞在不同的微环境中可分化为M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞 。M1型巨噬细胞表达MHC II、CD80、CD86和 CD16/32，分泌TNF-α、IL-6和IL-12等促炎因子，以及CXCL9、CXCL10和CXCL11等趋化因子。另外，M2型巨噬细胞高表达arginase-1(Arg1)和CD206，分泌抗炎因子IL-10以及CCL2、CCL17和CCL22等趋化因子 。

二、腹腔中M1和M2型巨噬细胞流式染色实例

Mouse (腹腔贴壁细胞): M1和M2型巨噬细胞

1.标志物：M1: F4/80⁺CD11b⁺CD86⁺ cells；M2: F4/80⁺CD11b⁺CD206⁺cells；

2.流式细胞仪：Beckman Coulter，CytoFLEX；

3.流式抗体及用量：PE anti-mouse CD86(1μg/test，105007，BioLegend)；APC anti-mouse CD206 (0.5μg/test，141707，BioLegend)；PerCP-Cy5.5 anti-mouseCD11b (0.25μg/test，101227，BioLegend)； AF488 anti-mouse F4/80 (1μg/test，123119，BioLegend)；

4.染色条件：首先FcRblock孵育(1μg/test；101319；BioLegend)，4℃，5-10min； 接着F4/80、CD11b、CD86表面染色， 4℃，30min；

5.细胞固定：PBS洗涤细胞2~3次，加入细胞固定液（Fixation Buffer，500ul，420801，BioLegend）室温避光固定30min。

6.细胞膜通透：150g离心5min弃掉固定液，加入2ml用ddH₂O 10倍稀释后的10×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer（421002，BioLegend）重悬细胞，150g离心5min弃上清，重复步骤2~3次。

7.胞内染色：100μL1×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer重悬细胞，加入CD206抗体（0.5μg/tests，141707，BioLegend），室温避光孵育30min。孵育完毕后，2ml1×Intracellular Staining PermeabilizationWash Buffer洗涤细胞2~3次，加入500μL cell staining buffer重悬细胞，上机。

8.分析软件：Flowjo (10.0.7)；

9.圈门策略及染色: (见下图)。