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一、 实验目的

通过Elisa实验技术检测各样本中目的蛋白的表达。

二、 实验样本

一、 实验结果

    1. 标准品检测值

    2. 标准品标准曲线

图1  Rat IL-4标准曲线

   标准曲线结果显示，本次IL-4检测结果可信。

3.样品检测结果

图2  Elisa检测柱状图

一、 ELISA实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠白细胞介素4（IL-4）水平。用纯化的大鼠白细胞介素4（IL-4）捕获抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被的微孔中依次加入大鼠白细胞介素4（IL-4），再与HRP标记的检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠白细胞介素4（IL-4）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠白细胞介素4（IL-4）含量。

四、 实验通用仪器及试剂

1. 主要仪器

2.主要试剂

一、 实验步骤

3.1 样品处理

浸提液我司提供。

3.2 ELISA检测步骤（以试剂盒操作说明书为准）

1. 标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样

品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。

4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T 的 20 倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此

重复5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同3。

8. 洗涤：操作同5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显

色15分钟. 

10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液

后15分钟以内进行。

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