ELISA检测实验报告(二)
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
Question:ELISA实验的方法有哪些?(普拉特泽生物提供长期稳定的ELISA实验外包服务)
答:
一、 实验目的
通过Elisa实验技术检测各样本中目的蛋白的表达。
二、 实验样本
三、 实验结果
1.标准品检测值
2.标准品标准曲线
图1 cTn-1 标准曲线
标准曲线结果显示,本次 cTn-1 检测结果可信。
3. 样品检测结果
图2 Elisa检测柱状图
四、 结果说明
如图所示,与Sham组相比,3个CVB3病毒处理组无显著性差异。
五、 ELISA实验原理
往预先包被的微孔中依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的cTn-1呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度 (OD 值),计算样品浓度。
六、 实验通用仪器及试剂
1. 主要仪器
2.主要试剂
六、重温一下ELISA实验步骤
1.样品处理
血清:3000xg离心10分钟,取上清即可检测。
2.ELISA检测步骤(以试剂盒操作说明书为准)
(1)制备好所有试剂、工作标准品和样品。
(2)从板架上移除多余的微孔板条,将它们放入装有干燥剂包的铝箔袋中,重新密封并4ºC存储。
(3)向适当的孔中加入50µL样品和标准品。
(4)每孔加入50µL抗体混合物。
(4)盖好孔,在室温下温育1小时,400rpm摇动。
(5)弃去溶液并用洗涤缓冲液洗涤3次。
(6)向每个孔中加入100μlTMB,400rpm避光室温孵育100min。
(7)每孔中添加100µL终止液,混匀1min,在450 nm处读取吸光值。
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