支原体检测实验方法介绍由普拉特泽生物表达检测平台总结分享。支原体是一类无细胞壁、形态多样的原核细胞微生物，是目前发现的最小的微生物，普拉特泽生物表达检测平台为广大科研人员提供支原体检测实验外包服务，欢迎咨询哦。

        支原体在细胞进行培养、传代时极易污染。目前我们常用的支原体检测方法有PCR法、DNA染色法、化学发光法、支原体培养法，我们来一个一个看：

        1、PCR检测支原体

        这种方法是目前最常用的方法，它的检测方式主要有凝胶电泳检测和荧光定量检测。其原理都是在支原体16S rRNA基因的保守区设计引物，通过检测支原体DNA来检测细胞中有无支原体的污染。如果有支原体的存在，则在琼脂糖凝胶电泳或者荧光定量扩增时，就可以检测到。这种方法的优点是检测灵敏度高，特异性好，检测速度快。

        2、DNA染色法检测支原体

        原理为使用DNA染色试剂（如：Hoechst 33258）对细胞进行染色，由于支原体中的核酸也可以被着色，所以，如果有支原体污染，会在细胞表面或者培养基中见到大小不等、不规则的荧光着色颗粒，与细胞核呈现的椭圆形、更大更亮荧光形成鲜明对比。这种方法有很多种实验检测方式，如果作为简单检测来说，最大的优点就是快速，直观；但是它的灵敏度会比较低，在支原体污染不严重时容易得到模棱两可的结果，只有在污染严重时才能得到可靠度较高的结果。小伙伴们如果使用这种方法来进行比较严谨的检测，可参考《中国药典》中的方法（见附录）来设置相应的对照及判定标准，但是相应的检测时间会有所延长。

        3、化学发光法检测支原体

        化学发光检测的原理是利用支原体内特有的酶，与提供的底物相互作用，使其中的ADP转化为ATP，荧光素酶可以利用产生的ATP与荧光素酶底物发生反应，产生可检测到的光，光可以被我们使用仪器检测到。如果没有支原体存在，荧光素酶就没有足够的ATP去发生反应产生光，仪器检测到的数值就比较低；如果有支原体存在，就可以使大量的ADP转化为ATP，供荧光素酶发生反应，产生大量的光，仪器检测到的数值就比较高。这种方法的优点是检测的灵敏度高，速度快，但是只能检测活的支原体。

        4、支原体培养法

        使用支原体肉汤培养基接种待测样品（细胞培养上清等），经过约7-21天的培养，观察有无支原体的生长，以此来判断细胞培养基中有无支原体存在。此种方法非常经典，得到全世界范围内认可，是被《中国药典》2015版第三部分3301，欧洲药典第六版2.6.7部分记载的支原体检测方法。虽然被广泛认可，但是需要耗时超级长（约1个月）才能知道是否有污染。

        好啦，这四种常见的支原体检测方法小编就介绍完啦！有没有帮到您呢？更多的关于支原体检测疑问或者检测方法请等待小编下期的分享哦，如果您也有支原体检测外包的需求的话欢迎随时给客服留言哦！