今天，我们来着眼于国自然热点-表观遗传调控相关的文献，主题方向是RNA甲基化。

那什么是RNA甲基化呢？

RNA甲基化是指在甲基转移酶的催化下，RNA的甲基腺嘌呤被选择性地添加甲基基团的化学修饰现象，主要形式为m6A甲基化。m6A甲基化修饰是可逆化的，包括甲基化转移酶（Writers）、去甲基化酶（Erasers）和甲基化阅读蛋白（Readers）等共同参与。与人类的发育，免疫，肿瘤生成和转移，干细胞更新，脂肪分化等过程息息相关，因此，RNA甲基化已成为科研中一个重要且热门的研究方向。

接着，我们来了解下RNA甲基化现在的研究行情~~

先从pubmed分析一下RNA甲基化这一热点问题的研究情况吧！在pubmed数据库中输入“RNA Methylation”，文章数量为44095篇，并在近10年来研究势头居高不下。

从国自然立项情况来看，近十年来，立项项目的数目也一直在稳步增长的状态。

既然m6A甲基化热度不减。

那么，究竟如何检测m6A？

整体思路如何设计？

我们跟着今天介绍的这篇SCI一起来学习学习吧。

文献题目是：Methyl CpG binding protein 2 promotes colorectal cancer metastasis by regulating N6-methyladenosine methylation through methyltransferase-like 14. 影响因子6.711分，刚刚热乎乎的发表在Cancer science杂志上。主要研究MeCP2与甲基转移酶14（METTL14）结合，通过改变m6A甲基化修饰来调节肿瘤抑制因子KLF4的表达，进而影响结直肠癌的进展。

接下来我们跟着作者的思路一起来看看吧!

一、MeCP2基因在结直肠癌（CRC）临床样本中的研究。

作者首先用WB和IHC方法发现了MeCP2蛋白在癌旁组织中的表达显著高于正常组织（Figure 1A - 1C），同时MeCP2 mRNA表达的升高与预后较差相关（Figure 1D），TCGA数据总生存率分析亦显示高MeCP2表达与预后较差呈正相关（Figure 1E）。以上结果说明：CRC肿瘤样本中MeCP2表达增加，与预后差相关，MeCP2可能是CRC的致癌基因。

二、MeCP2促进CRC的转移、减弱CRC细胞的m6A水平

为了进一步确定MeCP2在CRC中的生物学作用，作者在HT29、HCT8和SW620细胞中敲低了MeCP2基因（Figure 2A and 2B），HCT116、RKO、DLD1细胞中过表达MeCP2基因（Figure 2E and 2F）。Transwell实验发现，敲低MeCP2后，细胞的侵袭和迁移能力显著降低（Figure 2C and 2D），相反，过表达MeCP2后，细胞的侵袭和迁移能力显著提高（Figure 2G and 2H）。m6A斑点实验和免疫组化实验显示敲低MeCP2基因后细胞m6A整体水平显著上调（Figure 2I and 2J）。相反，过表达MeCP2后，细胞整体m6A水平显著下调（Figure 2K and 2L）。综上，MeCP2抑制CRC细胞的m6A水平。

三、MeCP2与m6A甲基转移酶METTL14相互作用

既然MeCP2与m6A有关，那么是哪一个m6A相关的基因与其存在相互作用呢？作者的COIP和WB实验发现MeCP2仅与METTL14存在相互作用，而与其他m6A相关酶无互作（Figure 3A -3D）。但是MeCP2、METTL14和METTL3之间存在比较复杂的相互作用（Figure 3E）。之后WB实验证实，在293T细胞中，METTL14截断蛋白与MeCP2和METTL3相互作用的较低（Figure 3F）。

作为一种内在紊乱的蛋白，MeCP2不能形成稳定的二级结构。作者猜测，这是这种结构的灵活性使MeCP2能够与METTL14相互作用。而接下来的免疫荧光实验发现显示MeCP2和METTL14在细胞核内重合（Figure 3G）。同时，MeCP2的过表达影响METTL3的蛋白表达水平，但是却不影响其转录水平的表达（Figure 3H and 3I）。

综上，这些结果有力地证实了MeCP2对RNA甲基化的影响依赖于MeCP2和METTL14之间的相互作用。

四、METTL14抑制CRC的转移

有研究表明，METTL14可以抑制结肠直肠癌的肿瘤转移。故，作者重点研究METTL14在CRC进展和肿瘤发生中的作用。首先，TCGA数据总体生存率分析发现低METTL14的表达与预后较差有关（Figure 4A）。在HCT116和RKO细胞中稳定敲低METTL14后，MeCP2的蛋白和mRNA水平并没有明显的改变（Figure 4B - 4D），而METTL3的蛋白水平显著降低（Figure 4B and 4C）。Transwell实验证实表观遗传RNA甲基化 - 知乎 (zhihu.com)