大家好，今天普拉特泽生物继续给大家介绍一个新的实验——支原体检测实验。支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物，极易感染实验室中的实验细胞，相信每一个亲手养过细胞的实验员都对这种又小又无处不在的原核生物深恶痛绝，一个不小心，培养基细胞团灭还摸不出原因。普拉特泽表达检测平台为广大科研服务人员提供专业的支原体检测外包服务，欢迎咨询。

        那现在我们先来看看，什么是支原体吧~

        支原体（mycoplasma）是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物，大小为0.1～0.3微米。由于能形成丝状与分枝形状，故称为支原体。支原体广泛存在于人和动物体内，大多对动物不致病，但是对人致病的支原体。

        支原体的革兰染色为阴性，但不易着色，一般用Giemsa染色，染成淡紫色。支原体主要以二分裂方式繁殖，亦可以出芽方式繁殖，分枝形成丝状后断裂呈球杆状颗粒。大部分支原体繁殖速度比细菌慢，适宜生长温度为35℃，最适pH值为7.8～8.0。在固体培养基上培养，形成典型的“荷包蛋”状菌落。支原体抵抗力较弱，对热、干燥敏感，对75%乙醇、煤酚皂溶液敏感，对红霉素、四环素、螺旋霉素、链霉素、卡那霉素等药物敏感，但对青霉素类的抗生素不敏感。临床上支原体致病性较弱，一般不侵入血液，但可通过黏附作用与宿主细胞结合，从细胞膜获取脂质，使细胞膜损伤。溶脲脲原体可分解尿素放出大量的氨，对细胞有毒害。

        细胞培养过程中，由于实验环境、操作者鼻腔口腔、实验器材等很多地方都有支原体的存在。因此，细胞发生支原体污染的频率很高。同时，由于支原体直径很小，仅在0.1～0.3微米之间，只有通过电镜才能看到。因此，支原体污染不易被实验者肉眼发觉。而支原体污染是个循序的过程，普通抗生素对其无效。因此，被支原体污染的细胞会持续受到影响，导致实验数据不准确。

        支原体检测试验的原理是根据特定序列设计引物PCR扩增后用琼脂糖电泳检测是否能跑出条带：

        原核生物的rRNA碱基序列非常保守，而rRNA操纵子上编码rRNA的DNA间隔区如16S和23S间隔区，各种生物种间的碱基序列差别很大。这个间隔区的DNA序列及长度在Mycoplasma 各个种间既有相对保守的部分，也有具有很大差异的部分。本制品是在编码16S 和23SrRNA的DNA 上设计一对F1/R1 引物，扩增编码16S 和23S rRNA 的DNA 间隔区。此反应体系只特异性扩增Mycoplasma DNA，检出灵敏度与特异性都很高。

        通过对支原体特定的序列设计引物，当存在支原体污染时通过PCR特异性扩增，会将目标DNA特异性地复制，然后通过琼脂糖电泳检测，会跑出条带出现阳性结果。反之当没有支原体污染时，由于没有模板，PCR无法扩增，则琼脂糖电泳跑不出条带，出现阴性结果。

        同时在取细胞样本进行支原体检测时要注意：

        1、取待检样本：

        一般是接种后进行 3-6d细胞培养的培养上清液；

        如果使用 Eagle 等常用的细胞培养基时，培养上清可直接加入到 PCR 反应液中；

        如果使用细胞悬浊液作为样品，则需要提取 DNA，再进行 PCR 反应。    

        2、一定要设置阳性对照（一般采用带有支原体特异片段的质粒）与阴性对照（H2O）；

        3、配制PCR反应体系时需在超净工作台里进行，避免污染。

        希望大家在培养细胞时永远不会在自己的培养基检测到支原体这种小小的原核生物，如果您正好有细胞需要进行支原体检测外包的话普拉特泽生物义不容辞！后两期支原体检测的详细操作步骤与细胞被支原体污染后的处理方法~下期见~