支原体培养法检测支原体操作步骤由普拉特泽生物表达检测平台分享，培养法检测支原体非常经典，准确率高，得到界内认可。普拉特泽生物承接的多例支原体检测外包实验中，有部分周期不紧急的实验会选择培养法。

        培养法为最为经济可靠的方法，但其实验周期较长，所以常用来进行对怀疑细胞的最后甄别。常用于细胞及临床治疗细胞的支原体检查。

        （一）材料与设备

        1. 精氨酸肉汤培养基   按说明称量粉剂，蒸馏水配制，高压除菌（加20％胎牛血清）。

        2. 支原体琼脂培养基   按说明称量粉剂，蒸馏水配制，高压除菌（加20％胎牛血清）。

        3. 其他   超净工作台、无菌吸管、试管架、培养试管／皿、37°C 培养箱。

        （二）操作步骤

        1. 样品的储存。样品取材后，最好尽快进行检测。样品如在24h 以内进行支原体检测，可储存在2~8℃; 如果超过24h 样品应放置于－20℃ 以下保存。-20℃保存的样品，进行检测时需重新加入到对照培养细胞中，培养72h 后，取上清直接进行接种检测。

        2. 准备12支精氨酸肉汤培养基、支原体琼脂培养基（半流体）。

        3. 将样品分别接种到10ml 精氨酸肉汤培养基、半流体培养基中（已冷却至36℃） ，每支培养基接种样品0.5~ 1.0ml， 每种样品接种6 支精氨酸肉汤培养基，3 支半流体培养基。

        4. 接种6d 后，取3 支精氨酸肉汤培养基中样品0.5 ~ 1.0ml. 复种于精氨酸肉汤培养基中。

        5. 36 ℃ 培养29d, 每隔3d 观察一次。记录实验结果。

        （三）结果判断

        培养结束时，精氨酸肉汤培养基分为6支接种，3支取出，3支复种。精氨酸肉汤培养基如有支原体生长，则液体颜色改变（粉色或黄色) 。

        半流体培养基中如有支原体生长，则出现絮状沉淀。

        虽然用培养法检测支原体准确率非常高几乎没有失误，但因为用培养法检测支原体的准确度非常高几乎没有失误，虽然由于耗时长而不如简单快速的PCR检测法，但胜在经济便宜，因此大家可以学下来，经费不足的时候使用哦~如果您还有其他的技术问题或有支原体检测外包的需求欢迎直接留言，普拉特泽随时在线！