HE 染色，也就是苏木精‑伊红染色，是病理学最基础、使用频率最高的染色技术。通过染色可以清晰展示组织、细胞形态结构，广泛用于组织学观察、病理损伤评估、模型表型鉴定等研究。 看似简单的 HE 染色，却非常考验操作细节，染色过深过浅、切片掉片、背景脏、透明不佳都是高频踩坑点。今天普拉特泽生物带大家梳理完整 HE 染色流程以及关键注意事项，科研人建议收藏备用✨
🧪HE 染色完整实验步骤
1. 脱蜡
二甲苯 Ⅰ：5‑10 min 二甲苯 Ⅱ：5‑10 min
目的：彻底去除石蜡切片当中的石蜡，脱蜡不净会导致后续染色不均匀。
2. 水化
无水乙醇 Ⅰ：3‑5 min 95% 乙醇：3‑5 min 80% 乙醇：3‑5 min 70% 乙醇：3‑5 min 蒸馏水：2‑3 min
目的：将切片从有机溶剂环境逐步过渡到水环境，为水溶性染料染色做准备。
3. 苏木精染色
苏木精染液，5‑10 min
碱性染料，将细胞核染成蓝‑紫颜色。
4. 分化
1% 盐酸乙醇，几秒‑1 min
快速洗去切片上多余的苏木精，把细胞核轮廓清晰凸显出来，分化时间一定要把控。
5. 返蓝
自来水 / 弱碱水，5‑10 min
经过酸分化之后细胞核颜色偏浅，返蓝处理让细胞核恢复鲜亮蓝色。
6. 伊红染色
伊红染液，1‑3 min
酸性染料，细胞质、细胞外基质、胶原纤维被染成粉红色。
7. 脱水
70% 乙醇：2‑3 min 80% 乙醇：2‑3 min 95% 乙醇：2‑3 min 无水乙醇 Ⅰ：2‑3 min 无水乙醇 Ⅱ：2‑3 min
梯度脱水，带走切片水分，水分残留会造成后续封片起雾。
8. 透明
二甲苯 Ⅰ：5‑10 min 二甲苯 Ⅱ：5‑10 min
让组织透明，适配中性树脂封片。
9. 封片
滴加中性树脂，盖上盖玻片，晾干之后即可镜检观察。
✅正常染色结果参考：
- 细胞核：蓝紫色
- 细胞质：粉红色
- 细胞外基质、胶原纤维：淡粉色
⚠️HE 染色关键注意事项
- 时间把控要精准 染色时间过长容易染色过深；时间太短染色不足，直接影响切片最终效果。
- 保证试剂新鲜 苏木精容易氧化，伊红容易沉淀，需要定期更换或者过滤染液。
- 水化、脱水必须彻底 有水残留会造成封片起雾发白；脱水不彻底，镜下视野模糊。
- 分化程度适度 分化过度→细胞核颜色太浅；分化不足→背景脏、非特异染色重。
- 切片厚度合适 切片厚度建议 4‑6μm，太厚会染色不均，不利于镜下观察。
- 封片前做好检查 规避气泡、树脂过多过少问题，保障镜下视野干净清晰。
💬普拉特泽生物小科普 HE 染色门槛低，但想要稳定获得高质量切片，试剂状态、孵育时间、操作手法每一步都不能马虎。很多课题组经常遇到染色批次不稳定、掉片、染色效果不理想的难题。
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