【应用简介】

GST pull-down 技术是体外验证蛋白质与蛋白质相互作用的经典实验。该技术常用于验证已知蛋白间的直接结合、筛选互作蛋白、分析蛋白结合结构域，是蛋白互作机制研究中基础且常用的体外验证手段。

【技术原理】

GST pulldown实验是一个有效验证酵母双杂交系统的体外试验技术。

基本原理：将靶蛋白-GST 融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上，作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”，目的蛋白溶液过柱，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”（目的蛋白），洗脱结合物通过 SDS-PAGE 电泳分离，最后经western blot或质谱分析，从而证实两种蛋白间的相互作用。可以用于确定某一个蛋白质与另一个蛋白质的直接作用关系、筛选某一个蛋白质直接结合的蛋白质族群以及验证酵母双杂交系统结果的有效性。

【实验方法】

1、诱饵蛋白的制备

2、亲和固定

3、加入待测样本孵育

4、洗涤除杂

5、洗脱富集

6、检测验证

【案例展示】

【技术总结】

优势：

1. 区别于CoIP，GST pull down技术可以明确两个蛋白质之间是否直接作用。

2. 可用于筛选与目的蛋白质直接结合的蛋白质族群。

3. 可联合酵母双杂交系统综合评估蛋白质之间的相互作用关系，是一个有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术。

不足：

1. 体外表达的重组蛋白，无法完全模拟特定生理状态下的蛋白质活性及结合情况。

【送检标准】

【交付标准】

1、实验报告

2、真实实验结果

3、原始图片

4、实验原始数据

5、剩余物料在周期内可返还（超过周期，不予返还）