【应用简介】

随着分子生物学研究尤其是人类基因组计划的迅速发展，为适应对众多基因或蛋白进行功能研究的发展趋势，已出现了很多新技术。其中酵母双杂交技术以其简便，灵敏，高效以及能反映不同蛋白质之间在活细胞内的相互作用等特点在基因功能的研究中得到广泛的应用。

【技术原理】

酵母双杂交系统的建立基于对真核生物调控转录起始过程的认识。酵母转录因子GAL4含两个结构域：DNA结合功能域和转录激活结构域，前者可识别DNA上的特异序列，并使转录激活结构域定位于所调节基因的上游，后者同转录复合体的其他成分作用，启动相应基因的转录。将编码DNA结合功能域的基因与已知诱饵蛋白质基因构建在同一个表达载体上，在酵母中表达两者的融合蛋白，将编码DNA转录激活域的基因和cDNA文库的基因构建在AD-LIBRARY表达载体上，同时将上述两种载体转化改造后的酵母。当两种载体所表达的融合蛋白能够相互作用时，功能重建的反式作用因子能够激活酵母基因组中的报告基因，从而通过功能互补和显色反应筛选到阳性菌落。将阳性反应的酵母菌株中的AD-LIBRARY载体提取分离出来，从而对载体中插入的文库基因进行测序和分析工作。

【实验方法】

1、载体构建

2、酵母转化

3、筛选阳性转化菌

4、互作验证

5、结果判读

【案例展示】

【送检标准】

【交付标准】

1、实验报告

2、真实实验结果

3、原始图片

4、实验原始数据

5、剩余物料在周期内可返还（超过周期，不予返还）