【应用简介】

核酸和蛋白质是组成生命的主要物质，研究细胞内RNA与蛋白结合情况，可以了解转录后调控网络的动态过程，帮助我们发现的miRNA的调节靶点，RIP检测实验是应用于蛋白与RNA互作关系的重要参考。

【技术原理】

RIP 即RNA 免疫沉淀技术，在细胞天然生理状态下，通过特异性抗体靶向结合细胞内的目标 RNA 结合蛋白，沉淀蛋白及其所结合的 RNA 复合物，经过纯化分离复合物、去除蛋白后，提取结合的 RNA，最后结合 qPCR 等技术检测富集的 RNA，从而在体内真实验证 RNA 与蛋白质之间的相互结合。

【实验方法】

1、细胞裂解液的制备

2、磁珠与抗体的准备

3、RNA结合蛋白免疫沉淀

4、用蛋白酶ķ对RNA-蛋白复合物进行消化

5、RNA纯化

6、对结合在复合物上的RNA反转录，合成cDNA

7、Q-PCR验证RNA

【案例展示】

RIP-QPCR案例图

【技术总结】

常见问题：

1、经过免疫沉淀后的RNA浓度过低；

2、Input组目的条带无扩增；

3、RNA纯度未在1.8-2.1之间；

4、阴性对照IgG反应中有目的条带。

注意事项：

1、RIP反应体系中的试剂和抗体中均需保证无RNA酶；

2、细胞样本的数量较大，应按照所需要求提供细胞样本数量；

3、选购的相应的抗体应达到IP实验级别，并通过阴性实验反馈结果可信性。

【送检标准】

【交付标准】

1、实验报告

2、真实实验结果

3、原始图片

4、实验原始数据

5、剩余物料在周期内可返还（超过周期，不予返还）