【技术原理】

在斑点杂交中，要检测到的生物分子不是首先通过电泳分离出来的，相反，将含有被检测分子的混合物直接点在膜上，烘烤固定。然后用核苷酸探针（Northern blot、Southern blot）或抗体（Western blot）杂交后检测。这种方法耗时短，可做半定量分析。一张膜上可同时检测多个样品。

【实验方法】

一、DNA斑点杂交：

①先将膜在水中浸湿，再放到15×SSC中。

②将DNA样品溶于水或TE，煮沸5min，冰中速冷。

③用铅笔在滤膜上标好位置，将DNA点样于膜上，每个样品一般点5μl（2-10μg DNA）。

④将膜烘干，密封保存备用。

二、RNA斑点杂交：

与上法类似，每个样品至多加10μg总RNA（经酚/氯仿或异硫氰酸胍提取纯化），方法是将RNA溶于5μl DEPC水，加5μl甲醛/SSC缓冲液（10×SSC中含6.15mol/L甲醛），使RNA变性，然后取5-8μl点样于处理好的滤膜上，烘干。

三、蛋白斑点杂交：

①先将PVDF膜在甲醇中浸湿，再放到PBS中，然后用滤纸吸干表面水渍。

②将蛋白样本变性处理，取2μl点样于膜上，烘干。

【案例展示】

【送检标准】

【交付标准】

1、实验报告

2、真实实验结果

3、原始图片

4、实验原始数据

5、剩余物料在周期内可返还（超过周期，不予返还）