【实验原理】

蛋白免疫印迹（Western Blot）是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现已广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。

【实验方法】

1、 蛋白样品裂解，细胞需提前裂解

2、 SDS-PAGE凝胶电泳

3、 转膜

4、 免疫反应

5、化学发光

6、 结果分析

【案例展示】

WB凋亡相关蛋白表达

【技术总结】

1、 当进行接触滤纸、凝胶和膜的操作时，应戴手套，手上的油脂会阻断转移。

2、滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡，气泡会造成短路。

3、因为PVDF膜的疏水性，膜必须首先在甲醇中完全浸湿。而且在以后的操作中，膜也必须随时保持湿润（干膜法除外）。

4、滤纸可以重复利用，上层滤纸（靠膜）内吸附有很多转移透过的蛋白质，所以上下滤纸一定不能弄混，在不能分辨的情况下，可以将靠胶滤纸换新的。

5、转移时间一般为1.5 小时，( 1mA-2mA/cm²，10% gel)，可根据分子量大小调整转移时间和电流大小。

【送检标准】

【交付标准】

1、实验报告

2、真实实验结果

3、原始图片

4、实验原始数据

5、剩余物料在周期内可返还（超过周期，不予返还）