上一篇我们分享了细胞碎片和微生物污染的鉴别方法，确认只是细胞碎片干扰之后，很多科研同学最关心的问题就是：怎么把这些碎片去掉？很多人第一反应就是离心，但离心并不是万能的，不同细胞类型、不同碎片大小，适合的纯化方案完全不一样。普拉特泽生物在流式、单细胞测序、原代细胞分离项目中，需要频繁制备高纯度、低碎片的活细胞悬液，积累了丰富的样本纯化实操经验，今天就把常用的碎片去除方案整理给大家。
那离心到底能不能去掉碎片呢？ 答案是：能，但要看碎片是哪种、细胞是哪种。 (1) 悬浮细胞，离心洗涤是优选方案。300×g 离心 5 分钟，细胞大部分沉底，弃掉上清，就可以去除绝大多数小碎片，再用新鲜培养基重悬，重复 2～3 次，细胞碎片可降到初始量的 0.01%～0.1%，这也是流式细胞术、单细胞测序前制备干净悬液的标准操作。 值得注意的是，转速别贪快。常规哺乳动物细胞推荐 300～500×g、离心 5～10 分钟；原代细胞、干细胞、神经元这类脆弱细胞需要降到 200～300×g。核心原则：宁可多洗一轮，也别提高转速，转速过高会损伤细胞，细胞裂解后碎片反而更多，越洗越脏。 (2) 大碎片和死细胞，普通离心很难去除。尺寸接近细胞的碎片、密度更大的凋亡小体和死细胞，会跟活细胞一起沉淀，甚至沉在活细胞下方形成分层，单纯弃上清没有效果，反复洗涤改善有限。如果死细胞占比不高，可以采用低速离心法 “牺牲产量换纯度”：100～150×g 低速离心 3～5min，大部分完整活细胞沉降，密度较低的死细胞、凋亡小体和较小碎片留在上清。但该方法仅能部分提纯，会损失一部分活细胞。 (3) 贴壁细胞，靠离心基本无效。碎片大多黏附在细胞表面和培养皿底部，离心无法解决，优先采用 PBS 轻柔漂洗 + 定期换液的方式处理。
除了离心，还有其他方法吗？ 当然离心并不适合所有场景，除离心外，还有以下几种常用的细胞碎片去除方法： (1) 差时贴壁法：把细胞重悬后重新铺板，放入培养箱静置 30～60 分钟，活的贴壁细胞会在这段时间完成附着，碎片与死细胞无法贴壁；之后轻柔吸走上清，补加新鲜培养基，可去除 70%～90% 的碎片，该方法也常用于去除样本中成纤维细胞干扰。
(2) 过滤与筛网：40、70、100μm 细胞筛网适合去除组织团块、细胞聚集体和大块碎片，但对 1～5μm 的微小碎片无效。操作全程依靠重力自然过滤，禁止使用枪头挤压滤膜，避免滤膜破损。 (3) 密度梯度离心：适合碎片多、对细胞纯度要求高的场景。借助细胞分离液形成连续密度梯度，完整活细胞富集在特定密度层，碎片、死细胞留在上层，吸取目标细胞层即可获得高纯度悬液。缺点是成本偏高、操作流程复杂，多用于单细胞测序、流式分选之前的高标准样本纯化。
每种纯化方式各有优劣，大家可以结合细胞类型、下游实验要求、样本珍贵程度灵活选择。如果是珍贵原代样本、干细胞，不建议盲目多次离心或者强行纯化，避免细胞活性大幅下降。普拉特泽生物可提供原代细胞分离纯化、流式上机前样本制备、单细胞测序样本前处理、细胞功能学检测等一站式细胞实验外包服务，实验全程严格质控，降低碎片、污染带来的实验风险。有细胞实验方案设计或者外包需求，欢迎随时和我们沟通！
