细胞培养是细胞功能实验、流式、单细胞测序等诸多研究的基础，细胞状态好不好，直接决定后续实验数据是否稳定可靠。普拉特泽生物深耕细胞实验外包多年，日常接收大量细胞培养、细胞纯化、原代分离、稳转株构建等项目，经常遇到科研小伙伴咨询镜下小黑点的问题。很多同学盯着显微镜，分不清黑点是碎片还是污染，一旦误判，轻则浪费样本、耽误实验进度，重则整盘细胞报废。今天我们就来讲讲，怎么快速辨别镜下恼人的小黑点。
相信很多养细胞的同学都遇到过差不多的情况，盯着显微镜看了半天，越看心里越发毛，这些 “小黑点”，到底是细胞碎片还是微生物污染？这期我们来看看这些小黑点是什么，教大家快速判断。
细胞碎片和微生物污染在显微镜下确实容易混淆，但抓住三个区别，判断并不困难。 (1) 看运动方式：盯住同一个颗粒看 10 秒，细胞碎片只会做布朗运动，原地微微颤动，不会离开视野，而且常常和贴壁细胞处在同一个焦平面。细菌、支原体则完全不同，它们的运动是主动的，有方向性位移、能穿越视野，球菌可见翻滚，杆菌能直线或螺旋式游动。简单说，碎片是被水推着抖，微生物是自己游着走。
(2) 看数量涨不涨：这是区分碎片和污染最可靠的指标。碎片不会自我增殖，数量只会随细胞状态变差而缓慢增多，细胞状态恢复后反而会减少；微生物则完全相反，过夜培养后明显增殖，短时间内数量激增，甚至完全遮蔽细胞。如果实在不放心，可以做个空培养试验：取少量培养液放进新培养瓶，不加细胞养 2～4 天，如果黑点数量没有明显增加，基本就能排除微生物污染。
(3) 看培养基颜色：细菌污染会让培养基迅速变黄、变浑浊，通常在 12～48 小时内就能肉眼观察到；真菌污染则表现为白色或灰色的絮状菌丝团，后期可见棉絮状菌落。而细胞碎片不会改变培养基的颜色和透明度，即使碎片很多，培养基依然是清亮的。
