TSA利用基于IHC免疫组化的“<一抗-二抗-HRP＞底物”原理及步骤，TSA荧光化合物在HRP催化下与靶点附近的酪氨酸残基结合，生成稳定荧光化合物。与普通免疫荧光相比，TSA技术：
多重免疫荧光染色的实验原理及流程涉及使用HRP标记的二抗，HRP催化加入体系的TSA衍生荧光染料，生成活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸共价结合，将信号共价结合到抗原上。之后用热修复洗去非共价结合的抗体，再换下一种一抗来第二轮孵育，换另一种荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。mIHC借助于不同的荧光染料标记，通过多轮染色循环实现组织或细胞的原位多靶点染色。
影响酪胺的多重荧光 IHC 实验成功的因素有很多。一抗浓度： 多重小图中每种一抗的最佳稀释度必须凭经验确定，并且通常可能与制造商建议的稀释度存在很大不同，因为酪胺沉淀会引起荧光信号扩增。我们强烈建议使用中等强度的荧光团对每种组分进行滴定，来优化多重检测板的个别组分。顺序优化： 优化对组织切片应用多重小图中的抗体顺序，以确保多轮加热不会损坏靶标特异性表位，这点非常关键。我们建议使用中等强度的荧光团来检测多重检测板每个窄缝中的所有优化一抗，以确保荧光信号不受检测板内相对位置的影响。抗体-荧光团配对： 通常，使用最亮的荧光团检测表达最低的靶标来配对抗体，这是一种很好的做法。我们建议检测由优化的一抗组成的基质和每种可用的荧光团，以获得检测板上每种靶标的最佳信号强度和信噪比。 普拉特泽生物一站式科研实验平台，除 TSA 多重荧光染色外，还可提供 HE、IHC、单标免疫荧光、原位杂交、透射电镜、动物造模、细胞与分子实验等全链条科研服务，支持整体课题合作。所有实验可签订协议，原始数据完整交付，永久售后。有 TSA 多标染色方案咨询、样本预实验需求，欢迎联系我们：18570028002 或 微信 pulateze666
