斑点印迹Dot Blotting的操作步骤

      科研中大量样本需要快速验证蛋白 / 核酸是否存在、对比相对表达量，跑 WB 制胶转膜耗时长，样本量大时很容易翻车。斑点免疫印迹（Dot Blot，斑点免疫印迹）凭借无需电泳、通量高、操作简便的优势，成为快速筛选样本的优选方案。今天普拉特泽生物带大家深入了解这项技术👇

    表达有差异，差异影响表型是科研的核心。随着测序技术的进步，我们可以从组织和细胞等不同层次分析基因的表达情况，构成了差异分析的基础。将各种生物大分子从凝胶转移到一种固定基质上的过程称为印迹技术（Blotting），已广泛用于DNA、RNA和蛋白检测。其中，DNA印迹技术称为Southern Blotting；RNA印迹技术称为Northern Blotting；蛋白印迹技术称为Western Blotting，也是目前应用最广泛的一种印迹技术。WB通常用于特定目标蛋白的表达验证。但是其实验步骤复杂，一次性处理样品能力有限，所得结果只能进行半定量分析，限制了其在高通量样本蛋白表达检测中的应用。相比于Western Blotting，斑点印迹技术（Dot Blotting）通过简化流程（不经过凝胶电泳），即可完成高通量样本蛋白表达水平的检测。不过，结果仍然是以半定量形式呈现。

    在斑点印迹中，要检测到的生物分子（DNA、RNA和蛋白均可）无需通过凝胶电泳分离，而是将含有被检测分子的混合物直接点在膜上，晾干固定；再用核酸探针或抗体杂交后，即可检测。这种方法耗时短，可半定量。一张膜上可同时检测多个样品，实现高通量。

Dot Blotting的一般实验步骤：

1. 加样。取硝酸纤维素膜，裁成需要的长度，用铅笔画出1cm×1cm的小格。将不同浓度的标准品稀释液、样品、阴性对照、阳性对照，各取2ul点在膜上正方形小格里。
2. 晾干。将点样后的膜自然晾干。
3. 封闭。将膜置于封闭液（5%脱脂奶粉溶液）室温封闭1小时（或4℃过夜)。
4. 孵育一抗。弃掉封闭液，加入稀释好的一抗工作液，室温孵育1小时（或4℃过夜）。
5. 洗涤。弃掉一抗工作液，用PBST或TBST缓冲液充分洗涤3 次，每次5分钟。
6. 孵育二抗。洗涤完成后，加入稀释好的二抗工作液，室温孵育1小时。
7. 洗涤。弃掉二抗工作液，用PBST或TBST缓冲液充分洗涤3 次，每次5分钟。
8. 曝光。取出硝酸纤维素膜，吸水纸略吸去膜上多余溶液后，加入适量的发光液，使膜上均匀覆盖，室温孵育1-2分钟。显影

    普拉特泽生物可承接 Dot Blot 斑点免疫印迹实验服务，从样本前处理、点膜、封闭、抗体孵育到化学发光成像、灰度定量分析一站式完成。实验全程规范留存原始数据，结果可复核，支持蛋白、核酸样本定性及半定量检测。除斑点免疫印迹外，我们还可提供 WB、CHIP、IHC、TSA 多标、细胞造模、动物模型构建等全套分子细胞与病理实验外包服务，助力各位科研伙伴加速课题推进，减少实验试错成本。 有 Dot Blot 实验需求，欢迎咨询普拉特泽生物！