裸鼠皮下成瘤是肿瘤研究中常用的细胞来源异种移植（CDX）模型，利用裸鼠先天性T细胞免疫缺陷的特性，将人源肿瘤细胞接种至其皮下，使其不被排斥而生长成瘤。以下是实验的核心流程和关键注意事项：
实验核心步骤
- 细胞准备：选择处于对数生长期（密度80%-90%）的肿瘤细胞。胰酶消化后，必须用无血清培养基或PBS清洗两遍，彻底去除残余血清（血清会引起局部炎症反应，导致成瘤失败）。将细胞重悬并计数，调整至合适浓度，一般每只注射1×10⁶~5×10⁶个细胞，体积为100-200μL。对于难成瘤的细胞，可按1:1比例混入预冷的基质胶（Matrigel）。
- 动物选择：推荐选用4-6周龄的BALB/c裸鼠，体重18-20g。同批次实验需保证周龄差≤1周、体重差≤2g。若研究性别相关肿瘤（如乳腺癌MCF-7），需选择雌性裸鼠。
- 接种操作：优先选择血管丰富的右侧腋下中后部。用75%酒精消毒皮肤，捏起皮肤形成“小帐篷”，针头与皮肤呈15-30°角刺入皮下。进针后左右轻微挪动确认无阻力（确保在皮下而非肌肉），缓慢推注形成圆形鼓包。注射完毕后针头停留3-5秒，旋转缓慢拔出，并用棉签轻压针口防止漏液。
- 饲养观察：接种后约1-2周可观察到肿瘤。每2-3天用游标卡尺测量长径（a）和短径（b），体积计算公式为 V = 0.5 × a × b²。肿瘤直径一般不超过15mm，体积不超过2000mm³，需严格遵守动物伦理要求。
关键注意事项
- 细胞状态与重悬：细胞消化后需尽快接种（30分钟内），全程保持低温（垫纸放冰上，不可直接插冰）。注射前务必吹打混匀，防止细胞成团。
- 无菌与防漏液：全程严格无菌操作，避免裸鼠伤口感染。进针点与接种点尽量分离，旋转出针并按压是防止漏液的关键。
- 饲养环境：垫料需定期更换（建议隔天换），环境脏乱会刺激裸鼠的固有免疫系统，导致成瘤率大幅下降。
常见问题排查
- 肿瘤不长：可能是细胞活力差、接种量不足、小鼠周龄过大或存在免疫排斥。解决方法包括加入基质胶、增加细胞量、更换4-6周小鼠，或换用免疫缺陷程度更高的NOD-scid或NSG小鼠。
- 瘤子长起来又消失：初期观察到的鼓包可能是炎症反应或液体被吸收。需继续观察，若后续未再长出则说明成瘤失败。
- 肿瘤呈长条状：通常是因为进针太深打到肌肉，或拔针时细胞沿针道漏出。需调整进针角度，确保针尖完全在皮下，并旋转出针。
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