深耕分子生物学科研服务领域，普拉特泽生物拥有成熟标准化的WB（Western Blot）实验平台，配备多年实操经验的技术团队，常年承接细胞、组织样本蛋白免疫印迹整体实验。针对新手常遇到的蛋白降解、样本不纯、定量不准、实验重复性差等问题，我们拥有成熟的优化方案，以标准化流程、稳定可控的实验参数，为各类蛋白表达检测、机制研究、药物靶点验证课题保驾护航。
Western Blot蛋白免疫印迹，是目前科研领域验证蛋白表达最经典、使用频次最高的核心实验。很多同学WB做不出结果、条带杂乱、数据不可用，80%的问题都出在前期样本阶段。样本制备是WB的根基，根基不稳，后续电泳、转膜、孵育再标准也无济于事。本篇推文带大家吃透WB前置关键步骤：样本制备与蛋白定量。
一、试剂预处理：做好防降解准备
蛋白极易降解，磷酸化蛋白信号极易丢失，因此裂解液必须现用现配。常规样本加入蛋白酶抑制剂；检测磷酸化蛋白必须额外添加磷酸酶抑制剂，最大程度保护蛋白完整性与修饰位点活性，避免出现目的蛋白条带消失、信号偏弱的情况。
二、样本裂解：细胞/组织标准化操作
所有裂解操作全程冰上进行，低温抑制蛋白降解。细胞样本弃培养基后，PBS充分清洗2-3次，去除血清残留与杂质干扰，加入RIPA裂解液冰上充分裂解30min；组织样本提前充分研磨破碎，再进行冰上裂解，保证蛋白充分释放。
裂解结束后高速低温离心：12000 rpm、4℃离心10 min，仅吸取上层澄清蛋白上清，舍弃底部沉淀残渣，有效避免基因组DNA、组织碎屑造成后续电泳拖尾、背景脏、杂带多等问题。
三、BCA蛋白定量：保证实验严谨性
样本提取完成后，必须进行蛋白定量，这是组间结果可对比的前提。通过BCA显色法，依据标准品吸光度绘制标准曲线，精准计算每例样本的蛋白浓度，统一各组上样量。避免因上样量不均，导致条带深浅不一是样本差异还是操作误差，保证后续实验数据具备统计学意义。
样本制备与蛋白定量是WB实验的第一步，也是决定实验下限的关键。下一篇，我们将继续讲解WB核心环节：制胶、电泳与转膜，带大家搞定蛋白分离与转印关键技术要点。
如果您样本珍贵、预实验反复踩坑，可选择普拉特泽生物WB一站式服务，专业团队全程把控样本提取、定量等基础操作，从源头规避实验误差，让WB实验结果更稳、更准、更可重复！
