1、解释:细胞转染是一种常用的实验技术，用于将外源DNA、RNA或蛋白质等分子引入细胞内，以实现基因敲除、过表达、信号转导研究等目的。
2、原理：利用化学、物理或生物学方法，使外源分子穿过细胞膜进入细胞内部。细胞转染的原理主要包括细胞膜渗透性增加、内吞作用和融合作用.
1首先,细胞膜渗透性增加是指通过物理或化学手段使细胞膜通透性增加,使外源分子能够穿过细胞膜进入细胞
内。
2其次,内吞作用是指细胞通过吞噬囊泡将外源分子包裹起来，形成内吞泡,然后将其输送到细胞内部。
3最后,融合作用是指外源分子与细胞膜融合,直接进入细胞内。
3、方法：常用的细胞转染方法包括化学转染、电穿孔法、基因枪法和病毒载体法。破坏细胞膜,使外源分子进入细胞内
1化学转染是利用化学试剂(如聚乙烯亚胺、脂质体等)
2电穿孔法是利用电场作用使细胞膜通透性增加,使外源分子进入细胞内.其穿过细胞膜进入细胞内
3基因枪法是将外源分子包裹在微粒上，通过高速射击使其穿过细胞膜进入细胞内4病毒载体法是利用病毒载体将外源分子转染入细胞内。
4、常规转染的2类技术：
(1)瞬时转染(瞬转)外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA转染效率较高，在转染后24-72小时内(T依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,B半乳糖苷酶等来帮助检测。
(2)稳定转染(永久转染)也称稳定转染，外源DNA既可以整合到宿主染色体中，也可能作为一种游离体(episome)存在。尽管线性DNA比超螺旋DNA转入量低但整合率高。外源DNA整合到染色体中概率很小，大约1/104转染细胞能整合，通常需要通过一些选择性标记，如来氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基因)，潮霉素B磷酸转移酶(HPH)，胸苷激酶(TK)等反复筛选得到稳定转染的同源细胞系。
5、293T瞬转操作：
(1)293T细胞复苏:1从液氮罐中取一支冻存的293T细胞,迅速将其置于37°C水浴锅中解冻。解冻后的细胞经1000r/min,5min离心后,弃去上清。
2取一只灭菌的玻璃细胞瓶生物安全柜中打开，加入4mL10%DMEM培养基备用。
3吸取1mL10%DMEM培养基加入冻存管内并将细胞沉淀轻轻吹打混匀，细胞悬液及入含有培养基的玻璃细胞瓶中。
4置于37°C、5%CO2培养箱中培养,待细胞长满传代2
一了次,即可用于后续转染实验。
(2)细胞铺至6孔板当细胞密度达到80~90%时，弃去培养基，根据细胞状态用PBS洗涤2~3次，加入1mL0.25%胰酶消化30s，吸取4~5mL10%DMEM培养基将细胞吹落至培养基中。
26孔板每孔加入0.5ml细胞悬液,每孔再补加1.5ml培养基,细胞孔板置于37°C、5%CO2培养箱中培养直至细胞密度达到50%~60%。
(3)质粒转染:内,加入4.0ug目的质粒并吹打混匀.
1移液器吸取200ul无血清DMEM于1个1.5mL指型管日一了次,即可用于后续转染实验。
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(2)细胞铺至6孔板:1细胞密度达80~90%时，弃去培养基，根据细胞状态用PBS洗涤2~3次,加入1mL0.25%胰酶消化30s,吸取4~5ml10%DMEM培养基将细胞吹落至培养基中。
细胞密度达到50%~60%
26孔板每孔加入0.5ml细胞悬液,每孔再补加1.5ml培养基,细胞孔板置于37°C、5%CO2培养箱中培养直至
(3)质粒转染:内,加入4.0ug目的质粒并吹打混匀
1移液器吸取200uL无血清DMEM于1个1.5mlL指型管
2再吸取& ul TransIntro ELTransfection Reagent 加入质粒稀释液中混匀.!不同转染试剂、不同孔板，所使用的质粒转染量和转染试剂量均不同，根据所使用的转染试剂说明书进行操作。
3超净台内室温孵育20min。
4混合液滴加至6孔板中,37°C、5%CO2培养箱中培养。待细胞密度达到90%时，吸取细胞液铺至96孔板中,每孔滴,待长满即可进行IFA实验。
