炎症性肠病（IBD）包含溃疡性结肠炎（UC）与克罗恩病（CD），是一类慢性反复发作的肠道炎症疾病。遗传易感、肠道菌群紊乱、环境诱因与黏膜免疫失衡多重因素相互作用，造成肠道屏障持续受损。
肠道巨噬细胞是维持肠道稳态、调控炎症反应的核心先天免疫细胞，具备极强功能可塑性。炎症状态下，单核细胞浸润肠道固有层分化形成不同巨噬细胞亚群；IBD 患者体内分化通路发生偏移，促炎巨噬细胞大量蓄积、修复型巨噬细胞不足，炎症无法有效消退，持续造成上皮损伤。
泛素化是重要的翻译后修饰途径，依靠去泛素化酶（DUBs）精密调控 NF-κB、JAK-STAT、MAPK 等炎症信号通路。近年多项研究证实，多种去泛素化酶参与肠道巨噬细胞功能调控，参与结肠炎发生发展。
多功能去泛素化酶USP9X已被证实参与肿瘤进展、动脉粥样硬化、自身免疫病等多种疾病，具备显著的细胞依赖性调控作用，但 USP9X 在 IBD 肠道黏膜巨噬细胞中的功能与分子机制尚不明确。
2026 年 5 月 15 日，天津医科大学总医院曹海龙团队在《Cellular & Molecular Immunology》发表重磅成果：Macrophage USP9X attenuates colitis by restricting oncostatin M production via K27-linked deubiquitination of STAT1该研究系统阐明巨噬细胞 USP9X 依靠调控 STAT1 泛素化修饰抑制 OSM 释放，缓解肠道炎症，揭示全新 IBD 致病调控通路，有望攻克 IBD 抗 TNF 治疗应答不佳的临床难题。
一、临床样本线索：IBD 患者肠道巨噬细胞 USP9X 显著下调，与病情负相关
研究人员依托公共数据库 GSE66407、GSE73661 以及本中心独立 UC 患者队列开展分析：
✅ IBD 患者肠道黏膜 USP9X 转录水平显著低于健康人群；
✅ USP9X 表达量与 Mayo 内镜评分、血沉等疾病活动指标呈负相关；
✅ 单细胞测序显示：UC 患者单核 / 巨噬细胞群 USP9X 表达降低，主要集中在高表达 CD14、CD11b 的未成熟促炎单核细胞；
✅ 结肠组织免疫荧光证实：UC 患者 CD68⁺巨噬细胞内 USP9X 蛋白表达明显下降。
体外细胞实验进一步验证：IFN-γ 联合 LPS 刺激可显著下调巨噬细胞 USP9X 表达。
体外沉默 RAW264.7 细胞 Usp9x 后，巨噬细胞迁移、吞噬能力上升，M1 促炎标志物、促炎细胞因子大量上调，偏向促炎活化表型。
二、体内动物实验：髓系 USP9X 缺失加剧实验性结肠炎，阻滞单核巨噬细胞成熟
研究构建髓系特异性 Usp9x 敲除小鼠（Usp9xΔmye），分别使用 DSS 急性结肠炎、慢性结肠炎、TNBS 诱导结肠炎模型验证表型：
- Usp9xΔmye 小鼠结肠炎症状更重：体重下降更快、结肠明显缩短、疾病活动指数 DAI 与病理损伤评分显著升高；
- 小鼠肠道与外周血促炎因子 TNF-α、IL-1β、IL-6 大幅上升；
- 固有层炎症髓系细胞大量聚集：CD11b⁺Ly6C⁺未成熟单核细胞、中性粒细胞浸润增多；
机制区分实验证实：中性粒细胞增多是炎症微环境继发效应；利用氯膦酸盐清除巨噬细胞后，两种基因型小鼠炎症差异消失，说明巨噬细胞是 USP9X 发挥保护作用的核心载体。
单核 - 巨噬细胞分化谱系分析发现：Usp9x 敲除造成未成熟单核细胞堆积、成熟巨噬细胞数量减少；结肠组织 M1 型巨噬细胞显著增多，证明 USP9X 是单核细胞正常成熟、平衡巨噬细胞极化不可或缺的分子。
三、转录组锁定炎症表型，USP9X 直接靶向 STAT1，介导 K27 特异性去泛素化
研究者对 Usp9x 缺陷 BMDMs 开展 RNA-seq，差异基因显著富集细胞因子互作、TNF 炎症信号通路，再次印证 Usp9x 缺失驱动巨噬细胞过度促炎活化。
联合泛素化蛋白质组、免疫沉淀质谱筛选 USP9X 互作底物，锁定关键转录因子STAT1：
🔹 USP9X 与 STAT1 存在直接蛋白相互作用，结合区域位于 USP9X C1 催化结构域；
🔹 USP9X 特异性清除 STAT1 K544 位点 K27 连接泛素链；
🔹 USP9X 去泛素化活性依赖自身酶活，抑制剂 WP1130 可阻断该效应；
🔹 STAT1 K544R 突变后，不再受 USP9X 调控。
创新发现：该 K27 泛素修饰不调控 STAT1 蛋白稳定性，也不影响经典 Y701 磷酸化，开辟 STAT1 非降解型泛素调控新模式。
四、USP9X 通过调控 STAT1 核转运，抑制下游 OSM 表达，阻断炎症前馈环路
进一步功能探索揭示全新调控范式：
STAT1 K544 位点 K27 泛素化能够促进 STAT1 核转位、增强 STAT1 在染色质上的结合能力。
Usp9x 缺失时，STAT1 泛素化水平升高，更快、更多转入细胞核，富集于靶基因启动子区。
联合 CUT&Tag-seq 与转录组筛选，锁定关键效应基因 OSM（抑瘤素 M）。
OSM 是 IL-6 家族细胞因子，现有临床证据表明：IBD 患者 OSM 高表达与抗 TNF 药物治疗失败高度相关。
- USP9X 缺失促进 STAT1 结合 Osm 启动子，驱动 OSM 大量转录；
- 升高的 OSM 激活肠上皮 STAT3 通路，招募更多炎症髓系细胞，形成持续放大的炎症正反馈环路；
- 动物体内给予 OSM 中和抗体，能够完全消除 Usp9x 敲除带来的结肠炎加重表型，恢复单核巨噬细胞正常分化。
五、基因治疗佐证：髓系过表达 USP9X 有效缓解结肠炎
由于 Usp9x 基因序列较长，无法使用单一 AAV 包装，研究人员采用REVeRT 双 AAV9 反式剪接系统，通过骨髓腔内注射靶向髓系细胞实现 USP9X 全长蛋白重建。
DSS 造模结果显示：髓系过表达 USP9X 小鼠结肠损伤减轻、炎症因子下降、STAT1 泛素化水平降低，充分证实 USP9X 在肠道炎症中的保护功能。
普拉特泽生物科研服务延伸：
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如果你正在开展肠道免疫、巨噬细胞功能、泛素化、炎症疾病相关课题，欢迎联系普拉特泽生物，一站式承接体内动物造模、细胞功能实验与多组学测序服务！
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