m⁶A 作为真核 RNA 最核心、研究最火热的表观转录组修饰，广泛参与细胞增殖、代谢、肿瘤发生、疾病进展等关键生物学过程。在整套 m⁶A 研究体系中，全局 m⁶A 整体甲基化水平检测是课题启动的第一步，也是机制验证的核心基础实验。成为广大科研人筛选样本、验证甲基化酶功能、批量初筛差异样本的首选方案。今天普拉特泽生物给大家展示本公司的m⁶A RNA 斑点印迹实验的实验报告模板案例~
一、实验目的
利用 RNA m6A dot blot assays 技术检验不同的处理之后，样本中 RNA 甲基化整体水平。
二、实验样品及分组
2.1 实验样本
序号 名称/标记 样本类型 样本数量 样本来源
1 对照组 细胞 1 客户提供
2 sh-X 细胞 1 客户提供
3 OE-X 细胞 1 客户提供
备注：包括干预细胞用的相关试剂均按实验样品登记，每行登记一个或一组独立样品。
2.2 实验分组
1、对照组、sh-X
2、对照组、OE-X
三、实验结果
3.1 抗体工作信息
抗体名称
厂家
货号
工作条件
3.2 Dot Blot检测样本中RNA甲基化整体水平
四、结果说明
由图可得，与对照组相比，sh-X组 m6A 表达水平有所降低；与对照组相比，OE-X组 m6A 表达水平有所升高。
五、实验材料
5.1 主要仪器
仪器名称
5.2 主要试剂
产品名称
六、实验原理
RNA m6A dot blot assays 是将提取的总纯化 RNA 稀释成不同浓度，滴加在带正电荷的尼龙
膜上，交联固定，并用 m6A 抗体检测 mRNA 中 m6A 甲基化总体水平的方法。
七、实验步骤
7.1.
总 RNA 的提取
用 NanoDrop 方法检测 mRNA 的纯度，并稀释成不同的浓度。
7.2.
Dot blotting
(1) 在95℃的高温下将连续稀释的mRNA变性。在变性后立即冷却，以防止mRNA的二级结构的
重新形成。
(2) 将2 μl的mRNA直接转移至尼龙薄膜上。紫外交联，采用温和的方式洗去未结合的mRNA。
(3) 封闭：5%BSA，室温孵育1h。
(4) 在4℃、温和震荡的条件下，用抗m6A的抗体10 ml稀释缓冲液孵育薄膜。
(5) 在温和震荡的条件下，用10 ml的洗涤缓冲液对薄膜清洗3次，每次5 min。
(6) 用羊抗小鼠IgG-HRP在室温下孵育尼龙薄膜。
(7) 用10 ml的洗涤缓冲液洗涤薄膜，每10 min清洗一次，每次清洗10min。
(8) ECL显影观察。
m⁶A Dot Blot 是 m⁶A 表观转录组研究入门必做、性价比最高、数据最稳的基础实验，既能快速验证分组差异、辅助预实验筛选，也能完美支撑文章基础机制结果。
普拉特泽生物拥有成熟标准化的 m⁶A 实验平台，可承接m⁶A Dot Blot、MeRIP-qPCR、MeRIP-seq、LC-MS/MS 绝对定量全套表观转录组实验，全程标准化操作、严格内参质控、原始数据 + 完整结题报告交付，数据可直接用于 SCI 发文。 有样本需要检测、课题需要整体 m⁶A 验证，欢迎随时咨询！
