FISH实验原理及详细步骤

 FISH 全称荧光原位杂交（Fluorescence In Situ Hybridization），是利用核酸碱基互补配对，用荧光标记的探针与细胞 / 组织内靶 DNA/RNA 特异性结合，通过荧光显微镜观察信号，实现定位、定量、定性的分子细胞遗传学技术。

 一、实验原理 

碱基互补配对：变性使样本 DNA 双链解旋，荧光标记的单链核酸探针与样本中同源靶序列特异性杂交结合。 信号可视化：探针上偶联荧光基团（如 FITC、Cy3、DAPI），杂交后在荧光显微镜下检测荧光信号，直接观察靶基因在染色体、细胞核、组织细胞中的位置、拷贝数、结构异常。 特点：不用 PCR 扩增、可原位观察、多色标记可同时检测多个靶点，常用于染色体数目异常、基因扩增 / 缺失、融合基因、微生物鉴定等。

二、实验主要步骤（以细胞 / 组织样本 DNA‑FISH 为例）

（一）样本制备

1. 细胞样本：细胞培养→胰酶消化→低渗处理→固定（卡诺氏液 / 甲醇‑冰醋酸 3:1）→滴片，自然晾干。
2. 组织样本：石蜡切片脱蜡至水→蛋白酶消化；冰冻切片直接固定。

（二）玻片预处理

1. 玻片老化（增强细胞黏附）；
2. 蛋白酶 K 消化，去除蛋白，暴露核酸；
3. 漂洗，梯度乙醇脱水干燥。

（三）变性

1. 玻片放入70% 甲酰胺变性液，72℃左右变性，使染色体 DNA 双链解开；
2. 快速冰浴乙醇脱水，保持单链状态。

（四）探针变性与杂交

1. 荧光标记探针（DNA 探针）加热变性，成为单链；
2. 将探针混合液滴加在玻片靶区，加盖玻片密封；
3. 避光杂交：37℃恒温孵育过夜（12–16 h），探针与靶序列特异性结合。

（五）洗涤（去除未结合探针，降低背景）

（六）复染与封片

1. DAPI 染核（蓝色，标记细胞核 / 染色体）；
2. 抗荧光淬灭封片剂封片，避光。

（七）荧光显微镜检测

• DAPI：蓝色（细胞核）
• FITC：绿色
• Cy3：红色
  观察信号数量、位置，判读基因拷贝数、易位、缺失、扩增等。
• 
  

• 三、RNA‑FISH（检测 mRNA）简要区别

  1. 全程无 DNase 污染，防止 RNA 降解；
  2. 无需高温变性基因组 DNA；
  3. 探针直接与胞内 mRNA 杂交，观察基因表达定位。

  4. 科研路上，时间宝贵，不必为繁琐的实验消耗精力。选择我们的双荧光素酶实验外包服务，让专业团队为您的科研保驾护航，助力您快速获得高质量实验数据，加速科研成果转化！

     如果您有任何疑问可以联系我们：18570028002 或 微信 pulateze666