诱导多能干细胞（iPSC）是干细胞领域的热门研究工具，可将终末分化体细胞重编程，获得具备多向分化潜能的干细胞，在疾病模型构建、再生医学、药物筛选方向应用广泛。 普拉特泽生物深耕干细胞相关技术服务，日常承接大量 iPSC 构建、干细胞诱导分化、干细胞鉴定类项目，今天结合图解，带大家梳理 iPSC 构建完整五大流程，理清体细胞重编程全过程。
iPSC 构建五大核心站点：细胞身份重启之旅
01 细胞准备｜确定重编程起点
实验起始材料为成熟体细胞，常见选择：人外周血单核细胞、皮肤成纤维细胞等。
细胞来源、活力直接影响后续重编程效率，需要提前扩增培养，保证细胞健康、无支原体污染，作为重编程的起始种子细胞。
02 重编程信号｜松动细胞原有身份
通过外源导入重编程因子（经典 Yamanaka 因子等），向体细胞送入重编程信号。
信号会重塑细胞表观遗传修饰，关闭体细胞特异性基因、逐步激活干性相关基因，打破细胞原本稳定的分化状态，开启 “身份重置”。
03 培养与诱导｜持续观察细胞状态转变
递送重编程因子后，更换干细胞专用培养基持续培养诱导。
显微镜下持续监测细胞形态变化：原本梭形体细胞逐步发生形态转变，慢慢形成紧凑的干细胞样细胞团，这是重编程启动的直观标志。
04 候选克隆｜独立挑取、观察与扩增
诱导培养一段时间后，培养皿内会出现多个形态典型的干细胞克隆。
挑选形态规整、边界清晰、核质比高的独立候选克隆，分开传代扩增，建立单克隆细胞系。不同克隆重编程程度存在差异，分开培养便于后续筛选优质株系。
05 多维鉴定｜多重证据最终确认 iPSC
仅依靠细胞形态不足以判定成功构建 iPSC，必须开展多维度联合鉴定：
常见项目包括干细胞标志物免疫荧光、基因表达检测、核型分析、畸胎瘤形成实验 / 三胚层分化实验等。只有多项指标全部符合标准，才能证实获得稳定、合格的诱导多能干细胞。
小总结
iPSC 构建≠简单转染培养，从体细胞准备、重编程诱导、克隆挑取到全套鉴定，周期长、步骤繁琐，细胞培养环境、试剂体系、操作经验都会影响最终成功率。重编程过程容错率低，很多课题组容易卡在克隆形成、鉴定环节。
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