2021-10-12
当lncRNA遇到m6A修饰
参与m6A的蛋白可以分为writers,erasers和readers三类,其中writers往核苷酸上添加上甲基,erasers去掉核苷酸上的甲基,readers则是能够识别带有甲基修饰的核酸序列。
2021-10-12
参与m6A的蛋白可以分为writers,erasers和readers三类,其中writers往核苷酸上添加上甲基,erasers去掉核苷酸上的甲基,readers则是能够识别带有甲基修饰的核酸序列。
2021-10-09
关于lncRNA与转录因子的技术总结 1. LncRNA可以受转录因子的调控,也可以调控转录因子的功能,这两种功能可以单独成文,也可以串起来增加文章的丰度。 2. 由于肿瘤的缺氧特性,HIF-1α是最常用作lncRNA的上游调控的转录因子,除了HIF-1α外,还有SP1, P53,也常有文献报道。 3. 上述这篇文献的实验设计很精致,可以作为此套路的范例参考。
2021-09-29
关于lncRNA与RBP的技术总结 1. 关键的验证内容是lncRNA与RBP的结合,以及lncRNA对RBP与mRNA结合稳定性的调控 2. 一般来说不需要再深入研究lncRNA与RBP的机制 3. RBP存在功能多样性,可以正向,负向调控下游mRNA的稳定性 4. 如果没有做质谱的条件,也可以参考预测软件的结果找到lncRNA可能结合的RBP
2021-09-22
circRNA(circular RNA,环形RNA)是非编码RNA分子的一种,它具有以共价键形成闭合环状结构, 不存在有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴。circRNA大量存在于真核转录组中,不受RNA外切酶影响,表达更稳定不易降解。相当一部分circRNA都是由外显子序列构成,在不同的物种中具有保守性,同时存在组织及不同发育阶段的表达特异性。
2021-09-14
内参就是内部参照,一般是指管家基因编码表达的蛋白,它们在各个组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照参。内参则可以校正蛋白质定量、上样过程中存在的误差,保证实验结果的准确性。此外,内参可以作为空白对照,还可以检测蛋白转膜情况是否完全、整个WB显色发光体系是否正常。内参抗体种类很多,比如β-Actin、β-Tubulin、GAPDH等,下面简单介绍下如何选择内参。
2021-09-06
荧光蛋白在某种定义下可以说是革新了生物学研究——运用荧光蛋白可以观测到细胞的活动,可以标记表达蛋白,可以进行深入的蛋白质组学实验等等。特别是在癌症研究的过程中,由于荧光蛋白的出现使得科学家们能够观测到肿瘤细胞的具体活动,比如肿瘤细胞的成长、入侵、转移和新生。
2021-08-25
HSV标签(单纯疱疹病毒),V5标签,c-Myc标签蛋白,HA标签蛋白
2021-08-19
启动子是RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列,它含有RNA聚合酶特异性结合和转录起始所需的保守序列,多数位于结构基因转录起始点的上游,启动子本身不被转录。
2021-08-19
做体外重组蛋白表达系统的实验主要有四大类:原核表达系统、哺乳动物细胞表达、酵母表达系统及昆虫细胞表达。该实验大致步骤包括载体构建、表达鉴定和蛋白纯化。
2021-08-16
抗性基因是一种已知功能或已知序列的基因,能够起着特异性标记的作用。在基因工程意义上来说,它是重组DNA载体的重要标记,通常用来检验转化成功与否,如果抗性基因成功导入并表达基因,那么该生物就具有相应的抗性,据此判断基因表达载体是否成功导入细胞内。 在分子生物学实验中常用存在于质粒上的抗性基因,如抗四环素基因,将目的基因接到含该标记基因的质粒上,再将重组质粒导入受体细胞。理论上,受体细胞(如大肠杆菌)就对四环素表现抗性,当实验员用选择培养基(比如含有四环素的培养基)来培养受体细胞时,能够在培养基中存活下来的受体细胞就可以认为是成功地导入了重组质粒,这样,成功导入重组质粒的细胞就被选择出来。
2021-08-02
1.DSB修复,而不是NER,与啮齿动物的最大寿命共同进化。 2.SIRT6在刺激啮齿动物DSB修复中的活性与寿命共同进化。 3.五种氨基酸决定了小鼠和海狸SIRT6的不同活性。 4.更强的SIRT6导致更长的寿命。
2021-08-02
凝胶电泳是一种常用的实验室技术,可鉴定、定量和纯化核酸片段。我们常用的是琼脂糖凝胶电泳,可以用来分离鉴定和纯化DNA片段。将样品上样到琼脂糖胶的孔内并放入电场,使带负电荷的核酸向正极移动。蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷,在电场中受力大小不同,因此跑的速度不同,根据这个原理可将其分开。较短的DNA片段迁移较快,而最长的片段的迁移最为缓慢,从而实现基于DNA片段大小的分离。

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