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外泌体的提取和鉴定及权威综述【收藏干货】

2021-04-25 16:27:50

来源/作者:普拉特泽生物-医学整体课题外包

  当我们想要对一个领域有一个总体概览的时候,要get这个领域的关键信息,最快速的方法就是阅读这个领域最权威、最全面的几篇综述了。我们这次特地整理了外泌体领域最重要的几篇综述,供各位大大们阅读参考啦~


  外泌体(Exosome)是由活细胞分泌的直径约为30-150 nm的小囊泡,具有典型的脂质双分子层结构,能很好的保护其包被的物质,且能靶向特定细胞或组织,因此是一种很好靶向给药系统targeted delivery system);存在于细胞培养上清液、血清、血浆、唾液、尿液、羊水以及其它生物体液中;外泌体携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息,不仅在细胞与细胞间的物质和信息传递中起重要作用,更有望成为多种疾病的早期诊断标志物。

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图1:细胞释放外泌体


>>>外泌体不同提取方法的优缺点对比


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>>>外泌体的鉴定

1、电子显微镜识别外泌体(形态学)

2、粒径大小(粒径分析)

3、Western blot 检测外泌体(标志蛋白)

4、流式细胞仪鉴定(外泌体的表征)



>>>得到了外泌体之后如何做?

  外泌体携带大量功能性的miRNA,少量的mRNA、lncRNA,以及特异性的蛋白质(如细胞因子、生长因子)等生物活性物质,在体内参与细胞通讯、细胞迁移、促血管新生和抗肿瘤免疫等生理过程,与多种疾病的发生和进程密切相关。对外泌体验明正身之后,就可以在蛋白水平和核酸水平对其进行检测和深入分析了。



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>>>外泌体领域综述

推荐4篇相对较早、较全面、权威的综述

1、Thery, C., et al. (2002). "Exosomes: composition, biogenesis and function." Nat Rev Immunol 2(8): 569-579. 2017年最新IF=39.416(描述了将外泌体定义为特定的分泌囊泡群体的物理性质,总结了其生物学效应,特别是免疫系统,讨论了分泌囊泡可能作为细胞间信使的潜在作用。)

2、Raposo, G. and W. Stoorvogel (2013). "Extracellular vesicles: exosomes, microvesicles, and friends." J Cell Biol 200(4): 373-383. 2017最新IF=8.717(专注于EV的特性和目前提出的形成、定位和功能的机制)

3、Yáñez-Mó, M., et al. (2015). "Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions." J Extracell Vesicles 2017年最新IF尚无(讨论各种组织和体液中EVs从细胞系统到器官的分子内容和功能。还回顾了细菌、低等真核生物和植物中EVs的生理机制,突出了新兴通信系统的功能一致性)

4、Tkach, M. and C. Thery (2016). "Communication by Extracellular Vesicles: Where We Are and Where We Need to Go." Cell 164(6): 1226-1232. 2017年最新IF=30.41(关注肿瘤细胞和微环境,但类似的结果和挑战也适用于EVs介导的其他的病理/生理过程)


推荐4篇具体应用的文章思路,一般都用经典的ABCD四要素,即A基因通过B基因/信号通路在C疾病中发挥D功能,那第一篇文章就是这样的套路:

1、Exosome-Transmitted lncARSR Promotes SunitinibResistance in Renal Cancer by Acting as aCompeting Endogenous RNA(lncARSR通过竞争结合miR-34和miR-449导致AXL/c-MET的增加进而激活STAT3, AKT, and ERK 信号通路促进肾癌细胞对舒尼替尼的耐药;同时,lncARSR可以被包被至外泌体传递至舒尼替尼敏感株,导致敏感株的耐药(Fig6))

2、Exosomes-mediated transfer of long noncoding RNA ZFAS1 promotes gastric cancer progression(外泌体介导的长链非编码RNA ZFAS1的转移促进胃癌进展)。

3、Macrophages derived exosomes deliver miR-223 to epithelial ovarian cancer cells to elicit a chemoresistant phenotype(巨噬细胞衍生的外泌体将miR-223递送至上皮卵巢癌细胞以引发化疗耐药性)

4、3D Cellular Architecture Affects MicroRNA and Protein Cargo of Extracellular Vesicles. (3D细胞结构影响细胞外囊泡的microRNA和蛋白质成分)


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