蛋白功能已成为当下研究的热点之一，蛋白间相互作用在细胞的生命活动中起着关键作用。相互作用的蛋白之间通过形成复杂的功能性复合体，参与细胞内一系列的信号级联反应，从而调控细胞及个体的生命活动。研究蛋白间相互作用的常用方法有：酵母双杂、双分子荧光互补、免疫共沉淀和GST pull-down等。那么今天普拉特泽生物来详细讲的——GST pull-down实验。

        GST pull-down实验---GST：谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-transferase)是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-GST（Glutathione-S-transferase谷胱苷肽巯基转移酶）融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽标记的磁珠上,作为与目的蛋白亲和的支撑物，充当一种“诱饵蛋白”，目的蛋白溶液与之孵育，可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析，从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白，“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。此方法简单易行,操作方便。　GST：谷胱甘肽巯基转移酶(Glutathione S-transferase)

        GST pull-down技术主要在体外验证两种蛋白之间是否存在直接的相互作用，其用途主要有两个方面：一是证实两种已知蛋白之间可能存在的相互作用；二是用于寻找能与已知的蛋白发生相互作用的未知蛋白。详细作用有：

        1. 确定某一个蛋白质与另一个蛋白质的直接作用关系。

        2. 筛选某一个蛋白质直接结合的蛋白质族群。

        3. 验证酵母双杂交系统结果的有效性。

        GST pulldown检测的优势与不足

        优势：

        1. 区别于CoIP，GST pull down技术可以明确两个蛋白质之间是否直接作用。

        2. 可用于筛选与目的蛋白质直接结合的蛋白质族群。

        3. 可联合酵母双杂交系统综合评估蛋白质之间的相互作用关系，是一个有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术。

        不足：体外表达的重组蛋白，无法完全模拟特定生理状态下的蛋白质活性及结合情况。

        通常我们研究蛋白互作的数据库有很多，这里给大家推荐五个，可以自行选择使用：

        1. MINT

        Licata L, Briganti L, Peluso D, et al. MINT, the molecular interaction database: 2012 update[J]. Nucleic acids research, 2011, 40(D1): D857-D861.

        网址：https://mint.bio.uniroma2.it

        2. STRING

        Szklarczyk D, Morris J H, Cook H, et al. The STRING database in 2017: quality-controlled proteinprotein association networks, made broadly accessible[J]. Nucleic acids research, 2017, 45(D1): D362-D368.

        网址：http://string-db.org/

        3. HPRO

        Prasad, T. S. K. et al. (2009) Human Protein Reference Database - 2009 Update. Nucleic Acids Research. 37, D767-72.

        网址：http://www.hprd.org/

        4. BioGRID

        Chatraryamontri A, Oughtred R, BoucherL, et al. The BioGRID interaction database: 2017 update[J]. Nucleic acids research, 2017, 45(D1): D369-D379.

        网址：http://thebiogrid.org/

        5. DIPOS

        Database of Interacting Proteins in Oryza SativaSapkota A, Liu X, Zhao X M, et al. DIPOS: database of interacting proteins in Oryza sativa[J]. Molecular BioSystems, 2011, 7(9): 2615-2621.

        网址：http://comp-sysbio.org/dipos/?id=5

        好啦，那关于GST pull down实验我们就简单介绍到这里啦！下期跟大家分享GST pull down实验的操作步骤，如果您正在准备操作这个实验或有GST pull down实验外包的需求，欢迎随时留言与普拉特泽分子检测平台的技术进行技术交流沟通！