Co-IP免疫共沉淀实验介绍【附视频介绍】
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
大家好,今天我们来学习一个新的实验——免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation),也就是我们常说的Co-IP实验。本文由普拉特泽生物分子检测平台总结分享,普拉特泽专业承接包括coip在内的各项分子互作生物实验代做服务,同时还开设了线上下常用实验操作技能培训班——《春风学院》,文尾附上coip免疫共沉淀实验操作视频供大家学习,一起来看看吧!
Co-IP是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。
Co-IP的原理当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X,那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。Co-IP确定的存在相互作用关系,但这种相互作用并不能确定使用直接作用还是间接作用。
Co-IP、ChIP、RIP、Pull down作为常见的分子互作验证方法。它们可以从检验的出发点来区分:Co-IP、ChIP、RIP是利用已知的蛋白检测体内相关蛋白、DNA、RNA,并通过蛋白抗体免疫沉淀分离目标蛋白、DNA、RNA。Pull down则是根据已知RNA(RNA pull down)或者已知蛋白(GST pull down)体外检验相关蛋白。Co-IP主要用于检测蛋白质与蛋白质之间相互作用,是IP实验的一种扩展, 基于IP反应的潜力,在样品溶液中捕获和纯化主要目标(抗原等)及通过天然相互作用靶标结合的其他的大分子。此外,还可以利用Co-IP来确定在不同条件下的蛋白质相互作用。
那么Co-IP实验作为科学研究蛋白相互作用力的经典方式,有哪些优缺点呢?
优点:
(1)相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的,处于天然状态;
(2)蛋白的相互作用是在自然状态下进行的,可以避免人为的影响;
(3)可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。
缺点:
(1)可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用;
(2)两种蛋白质的结合可能不是直接结合,而可能有第三者在中间起桥梁作用;
(3)必须在实验前预测目的蛋白是什么,以选择最后检测的抗体,所以,若预测不正确,实验就得不到结果,方法本身具有冒险性。
(4)灵敏度没有亲和色谱高。
好啦,关于Co-IP免疫共沉淀实验的介绍就讲到这里啦,了解小编的都知道小编介绍实验的四部曲,实验简介——实验步骤——注意事项——常见问题,所以小白们先对实验有一个简单了解,之后的实操学习才会更轻松哦,想先大家一步学习了解更多coip实验的同学欢迎点击:《CO-IP 理论+实操》先一步学习哦!