HE染色常见问题与处理方法由普拉特泽生物总结分享。一张优质的HE染色切片，应该具备切片完整、无皱褶、细胞核着色清晰呈蓝色、细胞质呈鲜红色、核仁核膜核内染色质颗粒清晰等特点，但多数切片染色新手即使是照书操作，仍然是破绽不断，惨不忍睹。普拉特泽生物病理实验平台在承接大量的HE染色代做实验后，积累丰富的操作经验，染过多种动植物、菌类组织样本，总结了HE染色时常见的各种常见问题与解决方法。一起来看看吧！

        1、切片在脱蜡后出现大片白色的斑点

        原因：（1）烤(烘)片温度太低，玻片在脱蜡前没有充分烤(烘)干；（2）切片在二甲苯停留时间不足；（3）二甲苯使用过久，造成脱蜡不完全。

        处理方法：如果玻片是由于没有烤(烘)干,先用无水乙醇处理去除玻片上的水分，然后重新用二甲苯进行脱蜡处理。如果烤(烘)干不足的现象比较严重，可能导致切片脱落，则无法补救。如果白色斑点是由于切片在二甲苯停留时间不足造成，或使用的二甲苯过久，切片则需退回到二甲苯操作步骤，使其停留时间相对长些，或更换二甲苯，进行重新染色。

        2、细胞核染色暗淡，即苏木精染色太淡

        原因：（1）切片在苏木精染色液停留时间太短；（2）苏木精染色液过度氧化，失去染色能力，不能再继续使用； （3）分化步骤处理时间过长。如果是骨组织细胞核暗淡，则多数是由于脱钙过度造成。

        处理方法：切片重新染色。如果组织在固定液固定时间过长，细胞核染色能力将减弱，须增加其在苏木精染色液的时间，或用一些方法增加组织的嗜碱性，以改善细胞核的着色。

        3、细胞核呈红、棕色改变

        原因：苏木精染色液过度氧化和切片在苏木精染液染色后返蓝不足。

        处理方法：首先，每次染色之前检查苏木精染色液的染色能力，发现氧化过度应及时更换。其次，可用流水、温水或弱碱性溶液如稀氨水、0. 2%碳酸氢钠等，在苏木精染色后，给切片以足够的蓝化时间。

        4、伊红着色淡

        原因：（1）伊红染液的pH值可能大于5；（2）蓝化液残留过多；（3）切片太薄；（4）切片经伊红染色后在乙醇脱水时间过长。

        处理方法：检查伊红染液的pH值，如果必要的话，用乙酸将其调节在4～5之间，从而使伊红染色色彩艳丽。确保每次蓝化步骤完成后，使用的弱碱性溶液被充分洗去，玻片上没有残留的弱碱性溶液。检查切片的厚度。脱水时不要让切片在低浓度乙醇停留时间过长，因为含水多的低浓度乙醇会将伊红的颜色分化掉。

        5、显微镜下见切片内有大量水珠

        原因：切片经梯度乙醇处理后没有完全脱水，导致二甲苯透明中性树胶封固后残留大量水分。

        处理方法：移去盖玻片，用二甲苯溶解封固剂如中性树胶。将切片置入新鲜的无水乙醇中，待切片重新脱水完全后，用新二甲苯透明，中性树胶封固。所有用于脱水和透明的液体，在使用一定时间以后，应即时更换。

        6、细胞质过染

        原因：（1）伊红染色液浓度太高，特别是焰红燃料、四溴四氯荧光素钠的存在；（2）切片在伊红染色时间过长；（3）切片在伊红染色后经乙醇脱水步骤时过的太快，而使乙醇分化伊红的作用不能产生。

        处理方法：适当稀释伊红染色液，减少伊红染色时间，或者使切片在乙醇脱水等步骤时，停留时间相对均匀。同样，也要检查切片的厚度是否合适。

        7、细胞核灰蓝

        原因：（1）组织处理温度过高、过热，在石蜡停留的时间过长；（2）固定时间太短，接下来就直接在高浓度的乙醇中行脱水处理。

        处理方法：理论上来说，加热处理仅在组织浸蜡步骤才使用，组织不能在热的蜡液中停留过长时间。如果由于某些原因不能进行下步包埋处理，完成浸蜡处理后的组织，可将组织连同塑料包埋盒一并放置在室温空气中，冷却凝固，以备包埋。待需要包埋时再重新加温直至石蜡融化即可。组织在处理前必须确保固定良好，脱水最好能从低浓度的乙醇开始。

        好啦，HE染色的常见问题与处理方法咱们就介绍到这里啦~还有不懂的直接点击：《HE染色理论+实操》跟着视频学习哦。有需要HE染色代做外包的同学欢迎留言需求哦。