大家好！HE染色实验问题答疑由普拉特泽生物为大家总结分享，文末附有HE染色视频供大家学习。HE染色作为病理观察最常见的染色实验，虽然普遍但新手村实验员们也总容易有各种稀奇古怪的问题，普拉特泽生物病理实验平台今天就给大家统一回答！

        Q1：红蓝失调怎么办？

        A：(1)偏蓝色：苏木素染色过深，分化不够；伊红试剂过期；伊红染色时间太短，分化过度。

              (2)偏红色：苏木素染色过浅，分化过度；组织固定不佳，细胞核不着色；脱蜡不彻底，苏木素染不上；苏木素氧化成熟不够；伊红染色过深，分化不足。

        Q2：细胞核染色过浅，颜色暗淡怎么办？

        A：造成这种情况的原因是切片在苏木素染液中停留过短，或苏木素过度氧化失效，或分化时间太长。

        解决办法：重新染色。将组织切片放入0.01%氢氧化钠、0.5%氨水、饱和的碳酸氢钠溶液、乙醇溶液，每个3-5 min即可，接着重新染色。适当增加组织的嗜碱性以增强核染色，如Zenker液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中3 h，自来水冲洗5-10 min染色，或Bouin液固定的切片可放入5%碳酸氢钠溶液中1h，自来水冲洗10 min染色。

        Q3：染色时切片脱落的原因以及应对措施

        A：(1)血栓、坏死或硬度较大的组织本身在染色时就极易脱落，应小心操作。

              (2)组织脱水、透明不佳，石蜡未完全渗入，脱蜡时组织收缩，复水时组织又吸水膨胀，造成脱片；还可能是组织脱水、透明过度，且浸蜡温度过高，导致组织变硬变脆，既不容易切片也极易在染色过程中脱片。对策：发脆发硬的组织可用棉签蘸5%氨水或2%冰醋酸溶液涂抹在组织表面10-15秒。然后精修出组织面，放入冰水混合物中泡1 min，再切片。

              (3)切片太厚；切片破碎，不整齐；展片时水温过低，展片不充分导致组织与玻片贴合不紧密；烤片时间和温度过短过低，或过久过高，一般使用防脱玻片烤片仅需30 min即可。

               (4)染色前入水步骤不够，组织吸水后快速膨胀，导致脱片;染色过程中漂洗粗暴，振荡过度;反蓝时间太久，反蓝液碱性过强，可以采用自来水反蓝，一般自来水PH7.5-7.8，效果很好。

               (5)1%盐酸乙醇分化时脱片。分化的原理是利用盐酸电离出的氢离子，改变组织表面电荷，使得吸附的染料脱落。由此看来，乙醇的作用并不大。并且分化液中的乙醇会使组织快速脱水而收缩，在随后漂洗时组织又快速吸水膨胀，极易脱片。因此完全可以改用1%盐酸水溶液作为分化液。

        Q4：成片的染色模糊不清，灰染

        A：(1)组织未及时固定，部分自溶;或固定不佳，深部组织未处理到。这种只能重新固定了。

              (2)尽管乙醇也是一种固定液，但尽量少用或不用，因为其会导致组织发硬变脆，染色效果不好。

              (3)包埋时蜡的温度过高，或切片后烤片时间和温度过久过高都不好，可能会导致无法染色。

              (4)脱蜡不彻底；染料有问题;分化过度导致的颜色变淡，镜下组织界限不清；染完后的脱水和透明不佳，水雾残留在组织上。

              (5)通风窗中(防止空气中的水雾)，戴口罩操作封片(减少哈气带来的水雾)。

        Q5：不管怎么操作，始终无法染色或淡染

  A：这种情况一般因为组织固定时采用了酸性甲醛；或者组织在甲醛中浸泡时间太长；或者久置的甲醛变性分解为甲酸。

              补救：防患于未然，要么使用新鲜的中性甲醛固定，要么在存放的甲醛中加一点碳酸钠中和甲酸。对于已经固定的组 织可考虑再次固定；对于已经制出的片子，染色前采用5%重铬酸钾溶液浸泡半小时以上，然后自来水漂洗5min，可改善染色。也可以将切片放入3%硫酸铁铵溶液中，补充染色媒介，增强苏木素与组织的亲和力(苏木素染色必须要媒介才能染上，单纯的苏木素与组织的亲和力很弱)。

        Q6：染色前烤片温度、时间对HE染色的影响？

  A：肯定有影响。最佳时间是60℃，25min即可。可活动至60-75℃，25-30min。

        Q7：可以把HE切片洗去做其他染色吗？
  A：可以，这种情况一般适用于组织量较少，或较珍贵时操作。

        好啦，HE染色实验的问题答疑就解释到这里啦！还有什么不明白的可以留言技术会一一详细解释的哦。想跟深入视频学习的点击：《HE染色理论+实操》