细胞划痕实验原理与操作步骤——细胞划痕实验外包
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
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一,细胞划痕(Wound Healing)实验原理
细胞划痕法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型,在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间,取出细胞培养板,观察周边细胞是否生长至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力,实验通常需设定正常对照组和实验组,实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力,可以判断各组细胞的迁移与修复能力。
二、细胞划痕(Wound Healing)实验应用及意义
细胞划痕(Wound Healing)实验是一种简单易行的检测细胞运动的方法,实验成本低。常用与用于研究肿瘤细胞的侵袭迁移能力,以及外源因素如,药物对细胞迁移能力的影响。
三、细胞划痕实验步骤
首先所有能灭菌的器械都要灭菌,直尺和 marker 笔在操作前紫外照射 30 min(超净台内)。
1、制造伤口:先用 marker 笔在 6 孔板背后,用直尺比着,均匀得划横线,大约每隔 0.5~1 cm 一道,横穿过孔每孔至少穿过 5 条线 →在空中加入约5X105 个细胞,具体数量因细胞不同而不同,掌握为过夜能铺满→ 第二天用枪头比着直尺,尽量垂至于背后的横线划痕,枪头要垂直,不能倾斜→ 用 PBS 洗细胞 3 次,去处划下的细胞,加入无血清培养基。
2、阶段培养及观察:放入37度5% CO2 培养箱,阶段时间取样,拍照。
四、细胞划痕(Wound Healing)实验注意事项
1、划痕法测量适用的细胞范围较小,一般只适用于上皮细胞,纤维样细胞。
2、虽然无血清培养可以忽略细胞增殖的影响,但是由于细胞内信号传导系统整体性的下调节,细胞迁移的速度也会慢很多。
OK,细胞划痕实验的原理与步骤以及操作时的一些注意事项我们就讲完了,大家应该有一个具体的了解了吧,当然有不懂的或者还有要给小编补充说明大聪明欢迎给客服留言哦,小编会第一时间对接技术给到大家最准确专业的回复,如果您有细胞划痕实验外包的需求,请认准普拉特泽!