细胞增殖检测常用方法MTT法和CCK8法详细介绍由普拉特泽生物为大家总结分享。普拉特泽旗下的细胞实验平台根据多年来承接的细胞增殖检测外包实验经验，给大家介绍两个我们在检测细胞增殖时时最常用的实验方法——MTT法和CCK8法，同学们打起精神来，这两种检测方法应用广泛值得学习哦。如果有需要用MTT和CCK8法检测细胞增殖实验外包的需求，请关注我们哦。

   
   首先我们来看看细胞增殖检测中的MTT法：
          MTT法检测原理：MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

局限性： 由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。

          MTT检测法注意事项：

   1、MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。

   2、MTT一般最好现用现配，过滤后4℃避光保存两周内有效，或配制成5mg/mL保存在-20℃长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。

   3、MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的薄膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者可以把操作台上的照明灯关掉。

   4、配制MTT时用PBS溶解,也有人用生理盐水配，60℃水浴助溶。

   那现在我们再来来看看细胞增殖检测中的CCK-8法：

          CCK-8法检测原理：CCK-8检测实际是基于CCK-8试剂盒的细胞检测方法。原理和MTT相似，都是由于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜，不同之处在于CCK-8法生成的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）是水溶的。故较MTT法减少了吸出培养液在加入有机溶剂溶解这一步，也算是MTT法的优化。相对与MTT ,CCK8试剂盒使用方便，即开即用；减少了实验过程重复性；减小了对细胞的毒性。另一方面，较于MTT法实验经费也会贵不少。

   CCK-8法注意事项：

  1. CCK-8的培养时间一般为1-4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察显色程度，根据细胞种类而定，需要摸索条件，CCK-8的最佳反应时间以具体显色的最佳时间为准。

  2. 使用 96 孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发问题。一方面，由于 96 孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加相同量的 PBS 、水或培养液；另一方面，可以把 96 孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

  3. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，所以还原剂 (例如一些抗氧化剂) 会干扰检测，如果待检测体系中存在较多的还原剂，需设法去除。用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

  4. 加入药物中如含有金属，对CCK-8显色有影响。终浓度为1 mM的氯化亚铅、氯化铁、硫酸铜会抑制 5% 、15% 、90% 的显色反应，使灵敏度降低。如果终浓度是10mM的话，将会100%抑制。

  5. 培养基中的酚红不会影响实验结果，酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不会对检测造成影响。

  6. 本产品可以检测 ，但不能检测酵母细胞。向 100 μL 培养液中加入 10 μL CCK-8 溶液，并培养 1-4 小时或过夜。

  7. CCK-8 试剂对细胞的毒性非常低。它和活细胞内的脱氢酶持续反应使溶液颜色不断加深，OD 值不断增加 (注: 活细胞内的脱氢酶是持续产生的) 。

  8. 要测定细胞的具体数量，建议同时做标准曲线。

  9. 建议采用多通道移液器，以减小平行孔间的差异。

   好啦，那这两个关于细胞增殖检测的实验方法同学们看懂了吗？MTT法和CCK8法更想学哪个呢？小编的建议是成年人的世界不需要选择，全都要！如果您不只有学习的需求，还有细胞增殖实验外包的需求，请认准普拉特泽细胞实验平台，您科研路上一个靠谱儿的大兄弟！