高脂饮食诱导NAFLD模型的5大核心指标及检测方法【全面解析】
来源/作者:普拉特泽-生物医学整体课题外包平台
非酒精性脂肪肝(NAFLD)是全球最常见的慢性肝病之一,而高脂饮食(HFD)诱导的动物模型是研究NAFLD发病机制和药物干预的重要工具。
普拉特泽生物为广大生命科学研究人员提供非酒精性脂肪肝小鼠实验,可根据实方案的要求选择不同的检测方法,本文就跟大家一起详细介绍——高脂饮食诱导NAFLD模型的5大核心指标
并提供 实验检测方法,帮助研究者准确评估模型建立是否成功。
1. 肝脏组织病理学指标(HE染色 & 油红O染色)
检测方法
⑴HE染色(苏木精-伊红染色):观察肝细胞脂肪变性、炎症浸润和气球样变。
⑵油红O染色:特异性染色肝组织中的脂滴,定量脂肪沉积程度。
⑶NAS评分(NAFLD Activity Score):根据脂肪变性(0-3分)、炎症(0-3分)和肝细胞气球样变(0-2分)综合评估NAFLD严重程度。
意义
脂肪变性 ≥5% 可判定为NAFLD模型成功。
NAS评分 ≥4分 提示NASH(非酒精性脂肪性肝炎)。
2. 血清生化指标(ALT、AST、TG、TC)
检测方法
①ALT(丙氨酸氨基转移酶) & AST(天门冬氨酸氨基转移酶):采用ELISA或生化分析仪检测,反映肝损伤程度
②TG(甘油三酯) & TC(总胆固醇):评估血脂代谢异常,常用酶比色法测定。
意义
⑴ALT、AST升高 提示肝细胞损伤(通常HFD喂养8-12周后显著上升)。
⑵TG、TC水平升高 表明脂代谢紊乱,是NAFLD的重要特征。
3. 肝脏脂质含量(肝组织TG、TC测定)
①检测方法
肝组织匀浆法:取肝组织匀浆后,用试剂盒(如Triglyceride Assay Kit)测定TG、TC含量。
②计算公式:
肝组织TG (mg/g)=测得TG浓度 (mg/mL)×匀浆体积 (mL)肝组织重量 (g)肝组织TG (mg/g)= 肝组织重量 (g)测得TG浓度 (mg/mL)×匀浆体积 (mL)
③意义
肝组织TG含量 >10 mg/g 表明显著脂肪沉积。
与血清TG结合分析,可评估肝脏脂质代谢异常程度。
4. 炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)
⑴检测方法
⒈ELISA法:定量检测血清或肝组织匀浆中的炎症因子水平。
⒉qPCR/Western Blot:检测肝脏中炎症相关基因(如TNF-α、IL-6)的表达。
⑵意义
TNF-α、IL-6升高 表明肝脏炎症反应,提示NASH进展。
结合HE染色(炎症细胞浸润)可更全面评估炎症程度。
5. 肝纤维化指标(胶原沉积、α-SMA、羟脯氨酸)
检测方法
▲天狼星红染色:观察胶原纤维沉积(I、III型胶原)。
▲α-SMA免疫组化:检测肝星状细胞活化(纤维化标志物)。
▲羟脯氨酸测定:定量肝组织胶原含量(纤维化程度)。
意义
▲纤维化评分(Ishak或METAVIR系统) 用于评估NAFLD向肝纤维化进展。
▲α-SMA阳性率升高 提示肝星状细胞激活,纤维化启动。
6.结论
高脂饮食诱导的NAFLD模型成功与否,需综合评估 肝脏病理、血清生化、脂质代谢、炎症反应和纤维化 这5大核心指标。
通过 HE染色、油红O染色、ALT/AST检测、TG/TC测定、ELISA(炎症因子)和天狼星红染色 等方法,可系统分析NAFLD
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