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细胞养不好,扩培、转染、药筛啥啥做不好!

2021-06-21 08:24:36

来源/作者:普拉特泽生物-医学整体课题外包

当你被老板逼着养一个从没养过的细胞,不知道该选择什么培养基。这个时候:

实验室里天天养肿瘤细胞的大师兄呵呵一笑脱口而出:DMEM高糖+20%FBS!

一直被原代细胞折磨的师姐不屑一顾:未必我F12不配拥有姓名???

小师妹小声的弱弱支招:要不去Invitrogene或Sigma的网站查查推荐的培养基?

...

我:我的细胞谁都没养过,我可是要着手建立一种全新细胞培养体系的人!



这种时候小朋友们要一起记住:

▶没有什么培养条件是绝对正确的!

▶没有什么细胞是咱养不活的!

▶参考文献没有那就不参考了!

▶反正文献也不一定是对的!

▶Ging!


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但如果你的细胞又没STR鉴定过,又没有亲自原代分离过,还各种支原体立克次氏体污染、黑胶虫污染,那你当我没说。我劝你尽快丢掉丢掉丢掉!




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我们今天先马克下商品化培养基的选择。

目前合成培养基主要有:
→基础培养基(最常用)
→无血清培养基
→无蛋白培养基
→限定化学成分培养基
它们对血清添加量的要求各不相同,目前最常用的是基础培养基
基础培养基是细胞生存的直接环境,为细胞生长提供丰富的营养物质,并能调节培养体系的 pH值和渗透压。因此培养基的质量和选择对于细胞培养至关重要。



各种细胞培养基的比较:

培养基类型

组成成分

应用范围

适用细胞

MEM培养基
(极限必需培养基)

仅含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和 8种维生素。

于各种哺乳动物细胞的生长

HeLa、BHK-21、293T、HEP-2、HT-1080、MCF-7、成纤维细胞、原代大鼠星形胶质细胞等

MEM培养基成分明细:

L-精氨酸、L-胱氨酸、L-谷氨酰胺、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸;氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醛、核黄素、硫胺盐酸盐、肌醇;氯化钙、硝酸铁、硫酸镁、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸二氢钠;D-葡萄糖

DMEM培养基

与MEM培养基相比,氨基酸的含量增加了2倍,维生素增加了4倍,同时还增加了非必须氨基酸、微量铁离子以及丙酮酸钠

DMEM高糖型:应用于生长快、粘附性低的细胞、杂交瘤的骨髓瘤细胞、克隆细胞、 DNA 转染的转化细胞、原代病毒宿主细胞、单一细胞。

原代成纤维细胞、

神经元胶质细胞、HUVEC、 平滑肌细胞、
HeLa、293T、 PC-12等细胞系

DMEM低糖:适合代谢作用较慢、依赖性贴壁细胞的培养。

DMEM培养基成分表:

甘氨酸、L-精氨酸、L-胱氨酸、L-组氨酸盐酸盐、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸;氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醛、核黄素、硫胺盐酸盐、肌醇;氯化钙、硝酸铁、硫酸镁、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸二氢钠;D-葡萄糖

RPMI1640

含有还原剂谷胱甘肽、高浓度的维生素、生物素、 维生素B12 以及 PABA

尤其适用于悬浮细胞的培养

HeLa 、Jurkat、 MCF-7 、PC12 、PBMC 、星形胶质细胞、癌细胞等

RPMI1640培养基成分:

甘氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-胱氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-羟脯氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸;生物素、维生素B12、氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醛、核黄素、硫胺盐酸盐、肌醇;硝酸钙、硫酸镁、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸二氢钠;D-葡萄糖、谷胱甘肽

DMEM/F-12

DMEM 培养基和 Ham's F–12 培养基的 1:1混合物

1.广泛用于支持多种哺乳动物细胞的生长;2.无血清培养基的基础;
3.低血清含量下哺乳动物细胞的培养以及克隆密度培养

MDCK、神经胶质细胞、成纤维细胞、人内皮细胞、大鼠成纤维细胞等

DMEM/F-12培养基成分:

甘氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-胱氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸;生物素、维生素B12、氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醛、核黄素、硫胺盐酸盐、肌醇;氯化钙、硫酸铜 、硝酸铁、硫酸镁、硫酸镁、氯化钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸二氢钠、硫酸锌 ;D-葡萄糖、次黄嘌呤钠、亚油酸、硫辛酸、腐胺、丙酮酸钠、胸苷

Ham's F-12

含有一些传统基础培养基没有的成分,如腐胺、次黄嘌呤、胸苷、锌等

1.低血清含量下时,特别适合单细胞培养和克隆化培养;
2.添加血清后,也广泛应用于癌细胞和原代细胞的培养

大鼠肝细胞、大鼠前列腺上皮细胞、软骨细胞、大鼠成肌细胞、鸡胚胎细胞等

Ham's F-12培养基成分:

甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸盐酸盐、L-胱氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸;生物素、维生素B12、氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醛、核黄素、硫胺盐酸盐、肌醇;氯化钙、硫酸铜 、硫酸铁、氯化镁、氯化钾、氯化钠、磷酸二氢钠、硫酸锌;D-葡萄糖、次黄嘌呤钠、亚油酸、硫辛酸、腐胺、丙酮酸钠、胸苷

IMDM

在DMEM 培养基的基础上添加了硒、 HEPES 、丙酮酸钠以及额外的氨基酸和维生素,并用硝酸钾代替了硝酸铁

非常适合于快速增殖,高密度细胞培养

Jurkat、COS-7 、巨噬细胞等

IMDM培养基成分:

甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-胱氨酸、L-谷氨酸、L-谷氨酰胺、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸;生物素、维生素B12、氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醛、核黄素、硫胺盐酸盐、肌醇;氯化钙、硫酸镁、氯化钾、硝酸钾、碳酸氢钠、氯化钠、磷酸二氢钠、亚硒酸钠;D-葡萄糖、HEPES、丙酮酸钠

Leibovitz's
L-15

不含用于CO2平衡环境的碳酸盐缓冲系统,而是用磷酸盐、 L-精氨酸、 L-组氨酸和 L-半胱氨酸作为缓冲剂。同时,用 D-半乳糖和丙酮酸钠代替D-葡萄糖以防止酸性代谢副产物乳酸的形成

适用于非CO2 平衡环境的细胞培养

HEP-2 猴肾脏细胞、胚胎和成人组织的原代组织块细胞培养等

Leibovitz's  L-15培养基成分:

甘氨酸、L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-半胱氨酸、L-谷氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸;氯化胆碱、D-泛酸钙、叶酸、烟酰胺、盐酸吡哆醛、核黄素、硫胺盐酸盐、肌醇;氯化钙、氯化镁、硫酸镁、氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、磷酸二氢钠;D+ 半乳糖、丙酮酸钠



附:

一、常见贴壁细胞培养条件:

1.接种浓度5×10*8个细胞/L;

2.培养基:MEM或DMEM,胎牛血清浓度:10%-80%;

3.37℃,5%CO2培养箱;

4.起始培养减少震荡,防止贴壁细胞脱落。


二、常见悬浮细胞培养条件:

1.原代培养时尽量去红;

2.短期培养可选择添加10%胎牛血清的RPMI 1640;长期培养淋巴细胞时,要加入细胞因子;

3.37℃,5%CO2培养箱;

4.每隔3天进行半量换液。



END