在细胞培养中遇到“小黑点”如何处理？【技术分享】

细胞在培养的过程中发现有黑点生成，可以通过：

1、肉眼观察培养基是否混浊；

2、同时在镜下观察培养细胞生长的状态，黑点是否游动，来进行判断污染的类型。

如果细胞被微生物污染，则细胞形态会以肉眼可见的速度发生改变。要判定是否为细菌污染，可以通过以下几点进行确认：

1）观察培养基是否变浑浊，变黄；

2）细胞状态明显变差；

3）镜下观察黑点是否游动或翻滚，要注意与布朗运动区别。

针对污染问题最重要的是防患于未然，向培养基添加双抗是最常用的避免细菌污染的方法，同时进行严格的无菌操作。

若是培养过程中发现被细菌污染，建议使用消毒剂处理后直接丢弃；若细胞较珍贵，则采用5-10倍的抗生素冲洗，作用24-48h，再换成常规培养基。

如果在镜下观察细胞，生长状态良好，与黑点出现前相比，细胞状态没有发生明显变化。黑点的出现可能与以下几种情况有关：

1）细胞因老化出现的破碎的细胞残骸；

2）血清经过反复冻融产生的沉淀；

3）配制培养基的pH值偏高，不宜细胞生长；

4）培养原代细胞中出现小黑点，可能是原代组织中的杂质，多次传代可以消除。

针对于这种情况，可以采用以下几种方法进行去除：

1）离心300-500rpm 3min左右分离完整细胞和碎片；

2）掌握细胞传代的最佳时机，尽可能地减少血清冻融次数；

3）将培养基配制成适宜细胞生长的pH值；

4）如果是贴壁细胞，用D-Hanks或PBS洗，再更换新鲜培养基。

还有一种可能，小黑点是血清热灭活的沉淀物。血清经过热处理后，沉淀物的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”，常会被误认为遭受污染，将血清放置37℃温育，往往使情况变得更糟，血清中的蛋白进一步的析出，所以误认为是微生物增殖，但检测培养基，是没有被污染的。多数细胞培养中血清的热灭活并不是必要的，很多情况下，热灭活并不会改善细胞的生长，却降低了支持细胞生长的能力。若非实验必须，不建议对血清采取热灭活操作。

所以，一般情况下，若非微生物污染所致，小黑点是不会影响细胞生长的，可以按照上述步骤排除成因并采取相应处理措施，如果细胞生长状态不佳，可尝试更换新的批号。另外进行细胞实验操作之前，将培养基平衡到室温即可，无需用37℃水浴加热。

以上就是关于

细胞培养中常见的“小黑点”问题处理方法

是不是已经帮您弄清楚了呢？

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